[发明专利]上尿路尿路上皮癌类器官的培养方法在审
| 申请号: | 202110995781.2 | 申请日: | 2021-08-27 |
| 公开(公告)号: | CN113736736A | 公开(公告)日: | 2021-12-03 |
| 发明(设计)人: | 余磊;陈洁琳;吴万军;余建辉 | 申请(专利权)人: | 深圳明澳生物科技有限公司 |
| 主分类号: | C12N5/09 | 分类号: | C12N5/09;C12N5/071 |
| 代理公司: | 深圳市创富知识产权代理有限公司 44367 | 代理人: | 曾敬 |
| 地址: | 518000 广东省深圳市光明区*** | 国省代码: | 广东;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 上尿路尿 路上 皮癌类 器官 培养 方法 | ||
1.一种上尿路尿路上皮癌类器官的培养方法,其特征在于,包括:
将上尿路尿路上皮癌组织小块置于含有Ⅱ型胶原酶的抑制剂中进行第一消化处理,得到第一消化物;
将所述第一消化物置于含有抑制剂的胰酶替代物中进行第二消化处理,得到第二消化物;
对所述第二消化物依次进行第一中和处理、过滤处理和离心处理,得到单细胞沉淀;
将所述单细胞沉淀置于预设培养基和基底胶的混合基底中进行重悬处理,得到含有所有细胞的凝胶悬液;
将所述凝胶悬液按照预设方案进行培养,得到上尿路尿路上皮癌类器官。
2.如权利要求1所述的上尿路尿路上皮癌类器官的培养方法,其特征在于,所述将所述凝胶悬液按照预设方案进行培养,得到上尿路尿路上皮癌类器官,包括:
将所述凝胶悬液接种至六孔板中进行孵育,得到固化凝胶;
将所述固化凝胶置入所述预设培养基中进行培养,得到所述上尿路尿路上皮癌类器官。
3.如权利要求2所述的上尿路尿路上皮癌类器官的培养方法,其特征在于,所述将所述固化凝胶置入所述预设培养基中进行培养,得到所述上尿路尿路上皮癌类器官,包括:
将所述固化凝胶置入所述预设培养基;
将所述预设培养基置入具有预设环境的培养箱中,以对所述固化凝胶进行培养;
每间隔第一预设时长对所述预设培养基进行更换;
当对所述固化凝胶培养第二预设时长后,得到所述上尿路尿路上皮癌类器官,所述第二预设时长大于所述第一预设时长。
4.如权利要求2所述的上尿路尿路上皮癌类器官的培养方法,其特征在于,所述将所述凝胶悬液接种至六孔板中进行孵育,得到固化凝胶,包括:
将所述凝胶悬液以预设容积/每滴接种至六孔板中孵育第三预设时长;
当所述凝胶悬液成型后,将成型后的所述凝胶悬液进行翻转,并孵育第四预设时长,得到所述固化凝胶。
5.如权利要求1所述的上尿路尿路上皮癌类器官的培养方法,其特征在于,在所述将上尿路尿路上皮癌组织小块置于含有Ⅱ型胶原酶的抑制剂中进行第一消化处理,得到第一消化物之后,所述将所述第一消化物置于含有抑制剂的胰酶替代物进行第二消化处理,得到第二消化物之前,还包括:
对所述第一消化物进行洗涤处理。
6.如权利要求1所述的上尿路尿路上皮癌类器官的培养方法,其特征在于,在所述将所述凝胶悬液按照预设方案进行培养,得到上尿路尿路上皮癌类器官之后,还包括:
当所述上尿路尿路上皮癌类器官成长至预设规模时,从所述六孔板上刮下所述上尿路尿路上皮癌类器官;
对所述上尿路尿路上皮癌类器官进行第一预设处理,得到上尿路尿路上皮癌类器官细胞。
7.如权利要求6所述的上尿路尿路上皮癌类器官的培养方法,其特征在于,所述对所述上尿路尿路上皮癌类器官进行第一预设处理,得到上尿路尿路上皮癌类器官细胞,包括:
对所述上尿路尿路上皮癌类器官进行离心处理,以去除附着在所述上尿路尿路上皮癌类器官上的所述预设培养基;
将离心处理后的所述上尿路尿路上皮癌类器官置于含有抑制剂的胰酶替代物中依次进行第三消化处理,得到第三消化物;
对所述第三消化物进行第二预设处理,得到所述上尿路尿路上皮癌类器官细胞。
8.如权利要求7所述的上尿路尿路上皮癌类器官的培养方法,其特征在于,所述对所述第三消化物进行第二预设处理,得到所述上尿路尿路上皮癌类器官细胞,包括:
对所述第三消化物进行第二中和处理和离心处理,得到上尿路尿路上皮癌类器官细胞团;
捣碎上尿路尿路上皮癌类器官细胞团,得到所述上尿路尿路上皮癌类器官细胞。
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