[发明专利]一种颈动脉粥样硬化家兔模型造模及检测方法

说明书

本发明公开了一种颈动脉粥样硬化家兔模型造模及检测方法，包括选取实验材料、分组、造模、取材、血清制备、石蜡切片、检测七个步骤，所述造模步骤中包括饲养和施术两个过程。本发明在实际操作过程中，通过前期选取实验材料、分组、造模建立完整的颈动脉粥样硬化模型，通过取材、血清制备、石蜡切片整理检测材料，通过检测验证模型完成度。

技术领域

本发明涉及中医研究技术领域，尤其涉及一种颈动脉粥样硬化家兔模型造模及检测方法。

背景技术

现代医学研究证实，高脂血症和糖尿病在动脉粥样硬化中占有非常重要的地位，某些代谢因素如同型半胱氨酸增高患者，冠心病的发病率明显增高，如合并糖尿病则更加加重其严重程度，而糖尿病亦可合并脂质代谢异常。

在治疗动脉粥样硬化的过程中，建立动脉粥样硬化动物模型可以更好地研究动脉粥样硬化的发病机制，也是进行动脉粥样硬化病理研究和药物开发的关键问题。近年来，许多学者应用各种动物模型对动脉粥样硬化进行了大量的实验研究。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：

在现有的模型造模中常用家兔、鼠、小型猪、非人灵长类和鸟类等动物来复制人类动脉粥样硬化病理模型，所采用的方法包括高脂喂养法，机械损伤法，转基因法，免疫法等。由于常规高脂喂养造模的成功率不够高。因此，为解决此类问题，我们提出一种颈动脉粥样硬化家兔模型造模及检测方法。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种颈动脉粥样硬化家兔模型造模及检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用了如下技术方案：

一种颈动脉粥样硬化家兔模型造模及检测方法，包括选取实验材料、分组、造模、取材、血清制备、石蜡切片、检测七个步骤，其特征在于，所述造模步骤中包括饲养和施术两个过程。

优选的，所述选取实验材料过程中，包括如下步骤：采用新西兰雄性家兔，4月龄，普通级，体重2.0-2.5kg。

所述分组过程中，包括如下步骤：家兔适应性饲养后，称重，将新西兰家兔随机分成正常对照组、模型组两组。

所述饲养过程中，包括如下步骤：

T1：正常对照组中，每兔每日进食普通颗粒饲料150g，自由饮水，喂养1周后灌服双蒸水5ml/kg/d，连续灌胃11周；

T2：模型组中，每兔每日进食高脂饲料(2％胆固醇、2％猪油、96％家兔普通颗粒饲料) 150g，自由饮水，1周后实施右颈动脉内膜空气干燥术，术后继续高脂喂养并同时灌服双蒸水5ml/kg/d，连续灌胃11周。

所述施术过程中，包括如下步骤：实验动物术前12h禁食，不禁水。在严格无菌条件下，动物经3％戊巴比妥钠30mg/kg静脉麻醉，颈部脱毛清洁消毒后，作颈正中切皮，于甲状软骨上方水平分离右侧颈总动脉，长约2.5cm，两端以动脉夹阻断血流，4号头皮针尽可能平行于血管纵轴方向穿刺进入阻断血流的血管，生理盐水冲洗置换出管腔内的血液后，按上已调节好流量为250ml/min的气流，历时5min，造成内皮干燥，然后管腔内充满生理盐水，放开临时动脉夹恢复血流。湿润棉片轻轻压迫穿刺点3-5min止血，待颈总动脉完全止血且血流通畅后缝合皮肤。术后每只给予庆大霉素肌注(按照成人等效剂量换算)，连续3天。

所述取材过程中包括如下步骤：

12周后，耳缘静脉注射空气10-20ml处死家兔，取右侧颈总动脉。暂且放入液氮罐中保存24h，取部分放入4％多聚甲醛液固定(用于HE染色)，余放入-80℃冰箱冷冻保存。

所述血清制备过程中包括如下步骤：