[发明专利]一种犬冠状病毒化学发光检测试剂的制备及使用方法

说明书

本发明公开了一种犬冠状病毒化学发光检测试剂的制备方法，属于生物检测制剂技术领域，具体制备过程包括如下步骤：制备磁性微球‑G19偶联物：采用EDC和NHS活化磁性微球，加入犬冠状病毒抗体G19震荡偶联，并在磁性微球缓冲液中进行保存，备用；制备G15‑吖啶酯偶联物：将G15与吖啶酯充分混匀进行标记偶联，震荡标记，封闭，纯化，保存在发光试剂缓冲液中备用；并通过本发明使用方法进行使用，获得检测样品的发光度RLU。本发明化学发光检测试剂的制备及使用方法，填补了国内犬冠状病毒化学发光检测试剂的空白，真正实现犬冠状病毒抗原的定性、定量、快速检测。

技术领域

本发明涉及生物检测制剂技术领域，具体属于一种犬冠状病毒肠炎的检测试剂的制备方法及应用。

背景技术

犬冠状病毒肠炎是由犬冠状病毒(canine coronavirus，CCV)引起的病毒性传染病病源，可使犬发生程度不同的胃肠炎症状，特征有频繁呕吐、腹泻、沉郁、厌食等症状。本病一年四季均可发生，以冬季多发，病犬是主要的传染原，犬可通过呼吸道、消化道、粪便及污染物传染。该病一但发生，同窝犬同室犬很难控制均可造成感染，幼犬死亡率较高。犬冠状病毒肠炎是犬最常见的病毒性传染病之一。针对犬冠状病毒肠炎对犬及人的严重危害，疾病的早期、准确筛查是预防其感染和传播、保证犬类健康的关键环节。目前临床中常用的免疫学检测方法有3种：酶联免疫吸附法(ELISA)、胶体金免疫层析法、免疫荧光微球法。ELISA法是发展和应用较早的一种经典免疫学方法，灵敏度较高，载体标准化难度较低，但检测速度慢、易污染、步骤较为繁琐。胶体金法是目前市场应用最广泛的宠物疾病快速诊断方法，突破了现有检测技术对人员、场所的限制，缩短检测时间，操作方便快速，但容易出假阳性，漏检等问题。免疫荧光法可实现定量检测，但假阳性率较高，影响了其广泛应用。一种新的检测技术-化学发光，或许可以完美解决上述检测方法的缺点。

化学发光免疫分析法是将高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、抗体、激素等检测。该法灵敏度高于ELISA，具有特异性强、线性范围宽、结果稳定、操作简化等特点，广泛应用于临床标本的检测，近年来发展迅猛。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。宠物疾病诊断不同于人体疾病诊断，宠物医院规模远远小于人的医院，常规的化学发光检测仪体积太大、操作繁琐而不适用于宠物医院，随着化学发光检测仪器的便携化、快速化、易操作化的发展，化学发光检测技术在宠物传染病的快速筛查市场必将大有可为。

然而，目前并没有真正研究出可实施的、具体的技术方案，将化学发光免疫分析法真正用于早期筛查、检测犬冠状病毒肠炎。

发明内容

针对背景技术中存在的缺陷和不足，本发明提供了一种犬冠状病毒化学发光检测试剂的制备及使用方法，填补了国内犬冠状病毒化学发光检测试剂的空白，真正实现犬冠状病毒抗原的定性、定量、快速检测。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

一种犬冠状病毒化学发光检测试剂的制备方法，所述犬冠状病毒化学发光检测试剂包括磁性微球-G19偶联物和G15-吖啶酯偶联物，具体制备过程包括如下步骤：

制备磁性微球-G19偶联物：采用EDC和NHS活化磁性微球，加入犬冠状病毒抗体G19震荡偶联，磁性微球封闭液封闭，磁力架中清洗磁性微球，然后在磁性微球缓冲液中进行保存，备用，得到磁性微球-G19偶联物；

制备G15-吖啶酯偶联物：将犬冠状病毒抗体G15与吖啶酯离心浓缩除去杂质，然后将G15与吖啶酯充分混匀进行标记偶联，在室温下轻轻震荡标记，加入发光封闭液封闭，透析除去未结合的吖啶酯；然后经过Sephadex G50凝胶层析柱纯化，保存在发光试剂缓冲液中备用，得到G15-吖啶酯偶联物；

所述犬冠状病毒化学发光检测试剂包括磁性微球-G19偶联物和G15-吖啶酯偶联物。