[发明专利]一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法

权利要求书

1.一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法，具体步骤为：

（1）向雌性小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素PMSG；

（2）用颈椎脱臼法处死小鼠，分离小鼠卵巢，PBS清洗，显微镜下去除其周围脂肪和被膜；

（3）在混合操作液中用注射器针头刺破卵泡使颗粒细胞和卵母细胞释放出来，筛网过滤，滤液离心弃上清；

（4）混合完全培养基重悬细胞沉淀接种，

其特征在于，操作液为DME/F-12 1:1+3%胎牛血清+2%青链霉素混合液+2%支原体清除剂。

2.如权利要求1所述的一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法，其特征为小鼠采用3周龄，体重10-13g，未成熟的雌性小鼠。

3.如权利要求2所述的一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法，其特征为PMSG的注射量为5-10IU，注射方法为腹腔注射。

4.如权利要求3所述的一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法，其特征为PMSG的注射量为8IU。

5.如权利要求2-4所述的任一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法，其特征为处死小鼠时间是在注射后46-48h后。

6.如权利要求5所述的一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法，其特征为混合完全培养基为DMEM/F-12 1:1+15%胎牛血清+1%青链霉素+1%支原体清除剂混合液。

7.如权利要求6所述的一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法，其特征为细胞首次换液时间为24-48h，以后每40-48h更换一次培养基。