[发明专利]快速高效的临床级色素上皮细胞诱导方法、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种RDM1培养基，所述RDM1培养基由50 ng/mL的noggin、1μM的XAV-939、5μM的LY2109761、10uM的Thiazovivin和基础培养基组成；

所述基础培养基是由DMEM/F12，KSR，Monothioglycerol Solution，ChemicallyDefined Lipid Concentrate，谷氨酰胺组成。

2.如权利要求1所述的RDM1培养基，其特征在于，所述基础培养基由88% DMEM/F12，10%KSR，5mM Monothioglycerol Solution，1% Chemically Defined Lipid Concentrate，1%L-谷氨酰胺组成。

3.如权利要求1所述的RDM1培养基，其特征在于，所述KSR替代为其他血清类似物替代，所述其他血清类似物包括FBS、马血清、HAS、BSA；所述谷氨酰胺替代为GlutaMAX™Supplement或L-谷氨酰胺。

4.一种诱导iPSC分化为高表达PAX6的细胞的方法，所述方法包括使用权利要求1-3任一项所述的RDM1培养基培养iPSC细胞6天。

5.权利要求1-3任一项所述的RDM1培养基在诱导iPSC分化为高表达PAX6的细胞中的应用。

6.一种培养基的组合物，所述组合物中包括权利要求1-3任一项所述的RDM1培养基和以下至少一种培养基：RDM2培养基、RDM3培养基、RDM4培养基、RMM培养基、REM培养基；

所述RDM2培养基由10μM的6-bromoindirubin-3′-oxime、2μM的SU5402、10μM的Thiazovivin和基础培养基组成；所述RDM3培养基由10μM的6-bromoindirubin-3′-oxime、2μM的SU5402、10μM的Thiazovivin、10mM的Vitamin B3和基础培养基组成；

所述RDM4培养基由89% DMEM/F12，10% KSR，1% N2培养基，1% L-谷氨酰胺以及10mMVitamin B3组成；

所述RMM培养基由97% DMEM/F12，2% B27培养基，1% L-谷氨酰胺组成；

所述REM培养基由79% DMEM/F12，20% KSR，1% L-谷氨酰胺，50μM β巯基乙醇组成；

所述RDM2培养基、RDM3培养基的基础培养基由DMEM/F12，KSR， MonothioglycerolSolution， Chemically Defined Lipid Concentrate，L-谷氨酰胺组成。

7.如权利要求6所述的培养基的组合物，其特征在于，所述RDM2培养基、RDM3培养基的基础培养基由88% DMEM/F12，10% KSR，5mM Monothioglycerol Solution，1% ChemicallyDefined Lipid Concentrate，1% L-谷氨酰胺组成。

8.一种诱导视网膜色素上皮细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1）使用权利要求1-3任一项所述的RDM1培养基和权利要求6所述组合物中的RDM2培养基诱导iPSC细胞分化为RPE祖细胞的步骤；

2）使用权利要求6所述组合物中的RDM3培养基和权利要求6所述组合物中的RDM4培养基诱导色素上皮前体细胞的步骤；

3）使用权利要求6所述组合物中的RMM培养基诱导色素上皮细胞成熟的步骤；

4）使用权利要求6所述组合物中的REM培养基进行色素上皮细胞传代培养的步骤；

使用所述RDM1培养基的时间为第1-6天，使用所述RDM2培养基的时间为第7-12天，使用所述RDM3培养基的时间为第13-17天，使用所述RDM4培养基的时间为第18-24天，使用所述RMM培养基的时间为第25-36天，使用所述REM培养基的时间为第37天之后。

9.权利要求6所述的组合物在诱导视网膜色素上皮细胞中的应用。