[发明专利]一种血浆游离DNA提取试剂盒及提取方法在审
| 申请号： | 202110833335.1 | 申请日： | 2021-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN115678886A | 公开（公告）日： | 2023-02-03 |
| 发明（设计）人： | 胡梦竹 | 申请（专利权）人： | 武汉臻熙医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 430206 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 血浆 游离 dna 提取 试剂盒 方法 | ||
1.一种血浆游离DNA提取试剂盒，其特征在于：包含结合液、洗涤液A、洗涤液B、洗脱液；
所述的结合液成分为：20-50mM Tris-HCl、pH 7.0-8.0，50-150mM氯化钾，2-4M异硫氰酸胍，10-30mM氯化锂；
所述的洗涤液A成分为：20-30mM Tris-HCl、pH 7.5-8.0，100-200mM氯化钾，2-4M盐酸胍；
所述的洗涤液B成分为：20-30mM Tris-HCl、pH 7.0-8.0，75-85％乙醇；
所述的洗脱液成分为：20-30mM Tris-HCl、pH 7.5-8.5，1-3mM EDTA。
2.根据权利要求1所述的血浆游离DNA提取试剂盒，其特征在于：还包含磁珠悬浮液。
3.根据权利要求1所述的血浆游离DNA提取试剂盒，其特征在于：所述的结合液成分为：20mM Tris-HCl、pH 7.8，70mM氯化钾，2.5M异硫氰酸胍，20mM氯化锂。
4.根据权利要求1所述的血浆游离DNA提取试剂盒，其特征在于：所述的洗涤液A成分为：20mM Tris-HCl、pH 7.8，150mM氯化钾，2.5M盐酸胍。
5.根据权利要求1所述的血浆游离DNA提取试剂盒，其特征在于：所述的洗涤液B成分为：20mM Tris-HCl、pH 7.8，80％乙醇。
6.根据权利要求1所述的血浆游离DNA提取试剂盒，其特征在于：所述的洗脱液成分为：20mM Tris-HCl、pH8.5，2mM EDTA。
7.使用权利要求1-6任一项所述的提取试剂盒提取血浆中游离DNA的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)取游离血浆200μL加入离心管中，再加入300-700μL结合液，震荡混匀1分钟；
(2)向上述混合液中加入15-40μL磁珠悬浮液，震荡混匀后，室温静置5-10分钟；
(3)将离心管放在磁力架上，使磁珠吸附，将溶液吸出丢弃；
(4)向离心管中加入500-800μL洗涤液A，震荡混匀1分钟，放在磁力架上，使磁珠吸附，将溶液吸出丢弃；
(5)向离心管中加入500-800μL洗涤液B，震荡混匀1分钟，放在磁力架上，使磁珠吸附，将溶液吸出丢弃；
(6)将离心管开盖放置1分钟，使乙醇完全挥发；
(7)加入25-60μL洗脱液，震荡混匀1分钟，放在磁力架上，使磁珠吸附，将溶液转移到一个新的离心管中，得到提取的游离DNA。
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