[发明专利]一种核苷酸层析分离中5’-AMP和5’-UMP的回收应用

说明书

本发明公开一种核苷酸层析分离中5’‑AMP和5’‑UMP的回收应用，包括以下步骤：阳树脂再生；AMP、UMP混合上样；水洗；洗脱；浓缩结晶；最终获得成品5’‑AMP和5’‑UMP。本发明是利用5’‑AMP和5’‑UMP结构的不同，即5’‑UMP无氨基，在酸性条件下电离不能带正电荷，不被阳离子交换树脂交换，而AMP有氨基，酸性条件下电离带正电荷，可以被阳离子交换树脂交换，所以通过阳离子交换树脂可以分离两种核苷酸，解决了部分AMP、UMP不能回收或回收后质量下降的问题，使总收率提高20％‑30％；本发明通过不同浓度的盐和碱盐洗脱的探究，找到了既节约洗脱溶液又能得到高纯度5’‑AMP和5’‑UMP的方法。

技术领域

本发明涉及核苷酸产品技术领域，具体涉及一种核苷酸层析分离中5’-AMP和5’-UMP的回收应用。

背景技术

核苷酸层析分离过程中5’-AMP和5’-UMP有约20％-30％交叉混合在一起，如果丢弃这部分会影响分离的收率，如果混在5’-AMP或5’-UMP中结晶会影响产品的质量；而且已有的阳柱工艺都是分离四种核苷酸，且洗脱方法一般都是用大量的水洗脱收集四种核苷酸，这样不仅用水量非常大，而且收到和核苷酸有交叉，得到的核苷酸产品纯度低。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种核苷酸层析分离中5’-AMP和5’-UMP的回收应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种核苷酸层析分离中5’-AMP和5’-UMP的回收应用，其创新点在于，包括以下步骤：

S1、阳树脂再生：阳树脂碱酸再生，水洗至pH＝3.0-4.0，洗掉树脂上的杂质，让树脂带电荷，待用；

S2、AMP、UMP混合上样：AMP和UMP混合物稀释至浓度20-30g/L，调pH＝2.0-2.5，上样，AMP被吸附，UMP不被吸附直接流出至碳柱中富集；

S3、水洗：上样结束后，AMP和UMP分别采用4倍柱体积水洗；

S4、洗脱：采用碱盐将AMP洗脱下来；采用碱乙醇将UMP洗脱下来；

S5、浓缩结晶：洗脱的AMP和UMP浓缩结晶得到成品AMP和UMP。

进一步的，所述步骤2中，AMP采用阳柱进行吸附，UMP采用碳柱进行吸附。

进一步的，所述步骤4中，分别用0.5M碱洗脱、2％NaCl洗脱、3％NaCl洗脱、4％NaCl洗脱、5％NaCl洗脱、4％NaCl洗脱+0.2M NaOH、4％NaCl洗脱+0.4MNaOH洗脱液进行AMP的洗脱。

本发明有益效果为：

1、本发明是利用5’-AMP和5’-UMP结构的不同，即5’-UMP无氨基，在酸性条件下电离不能带正电荷，不被阳离子交换树脂交换，而AMP有氨基，酸性条件下电离带正电荷，可以被阳离子交换树脂交换，所以通过阳离子交换树脂可以分离两种核苷酸，解决了部分AMP、UMP不能回收或回收后质量下降的问题，使总收率提高20％-30％；

2、本发明通过不同浓度的盐和碱盐洗脱的探究，找到了既节约洗脱溶液又能得到高纯度5’-AMP和5’-UMP的方法。

附图说明

图1为本发明的工艺流程示意图；

图2为实施例1的洗脱效果示意图；

图3为实施例2的洗脱效果示意图；

图4为实施例3的洗脱效果示意图；

图5为实施例4的洗脱效果示意图；

图6为实施例5的洗脱效果示意图；

图7为实施例6的洗脱效果示意图；