[发明专利]PHF6△

说明书

本发明公开了一种PHF6^△和JAK3^M511I双突变急性T淋巴细胞白血病小鼠模型构建方法和应用。本发明利用Vav1‑Cre小鼠和Phf6^fl/fl小鼠交配获得Vav1‑Cre；Phf6^fl/Y(Phf6^‑/Y)雄性小鼠；利用Mx1‑Cre小鼠和Phf6^fl/fl交配获得Mx1‑Cre；Phf6^fl/Y雄性小鼠，分别富集两种小鼠骨髓中Lin^‑细胞，感染过表达GFP‑JAK3^M511I的逆转录病毒，通过尾静脉注射，将GFP+细胞移植入致死剂量照射的受体小鼠，构建得到两种T‑ALL白血病小鼠模型。本申请模型可以快速在小鼠中传代，模拟PHF6基因和JAK3基因双突变的T‑ALL病人的白血病进程，用于靶向治疗药物筛选和疗效评价。

技术领域

本发明涉及动物模型构建技术领域，具体涉及一种PHF6^△和JAK3 ^M511I双突变急性T淋巴细胞白血病小鼠模型构建方法和应用。

背景技术

白血病(Leukemia)是一类造血干细胞恶性克隆性疾病，体现为造血干细胞的恶性转化及异常增殖并具有侵润其他组织的能力，以及造成骨髓中正常细胞的明显减少。急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)作为白血病中的一大类型，起源于T淋巴细胞祖细胞。异常增生的原始淋巴细胞不仅在骨髓内聚集，同时可以浸润骨髓外组织，如脑膜、淋巴结、性腺、肝等。T-ALL 在儿童和成人白血病中都有较高的发生率，占儿童淋巴细胞白血病(ALL)的 10％–15％，占成人淋巴细胞白血病的25％。

经典的T淋巴细胞白血病致病机制可以概括为以下几个方面：1)持续的NOTCH1信号通路激活。2)调控细胞生长的重要分子发生激活型突变。例如，JAK分子突变导致的JAK-STAT信号通路异常活化。3)T细胞发育相关转录因子的异常表达。例如，TLX1，TLX3，TAL1，LMO2，HOXA 等。4)细胞周期调控异常。例如，CDKN2A基因缺失。5)表观遗传学修饰的重要调节分子发生突变，例如TET2突变导致的DNA甲基化修饰异常， PHF6突变导致的染色质结构改变等。目前，T淋巴细胞恶性转化的内在调控机制仍不清楚，针对T-ALL的经典信号通路的靶向药物，只能延缓T-ALL 进程。T-ALL患者5年生存率不足50％，小儿T-ALL患者死亡率达20％，而复发性成年T-ALL患者的死亡率高达90％。

在T-ALL发展研究中，应用小鼠动物模型作为主要研究对象揭示其内在机理是最常见的技术手段之一。常见的急性淋巴细胞白血病小鼠模型包括由NOTCH1诱导的单突变T-ALL小鼠模型，MYC诱导的T-ALL转基因小鼠模型，Ezh2缺失导致的ETP-ALL的小鼠模型以及由JAK3^M511I引起的白血病小鼠模型等。但在临床病人中T-ALL的发生发展往往伴随着多种基因突变出现，并不是由单一的致病因素引起的。这类T-ALL患者其预后往往更差，对药物治疗更不敏感，由此可见，阐明T淋巴细胞恶性转化的内在分子机制对于为难治性T-ALL患者的精准治疗提供理论依据起着至关重要的作用。