[发明专利]染色体平衡易位患者的囊胚发育潜能评估方法

说明书

本发明提供了一种基于线粒体DNA拷贝数的染色体平衡易位患者囊胚发育潜能评估方法，主要流程包括活检取囊胚中3‑6个滋养外胚层细胞，采用MALBAC方法对活检细胞进行单细胞基因组扩增，扩增产物进行高通量DNA测序，测序量不低于20GB；通过测序数据分析囊胚的染色体整倍性和单位核基因组对应的线粒体DNA拷贝数即MCN，MCN=（常染色体映射区域×2×线粒体映射reads数）/（常染色体映射reads数×线粒体映射区域），在染色体整倍性囊胚中优先选择MCN低于320.5的囊胚进行移植。本发明方法有助于筛选出最具发育潜能的囊胚进行移植，使得行PGT的染色体平衡易位患者最大限度和最快实现妊娠，并且不增加患者的花费，还可以有效节约临床资源和成本。

技术领域

本发明涉及生殖医学领域，具体涉及一种基于线粒体DNA拷贝数的染色体平衡易位患者囊胚发育潜能评估方法。

背景技术

染色体平衡易位指的是两条染色体各发生一处断裂并相互交换其无着丝粒片断，形成两条新的衍生染色体称为相互易位，包括同源和非同源染色体之间的相互易位。染色体相互易位虽然引起染色体片段位置的改变，但仍保留了基因的总数，故又称为染色体平衡易位。染色体平衡易位(包括罗氏易位)是较常见的染色体异常，对携带者的表型一般不产生影响，但在减数分裂过程中产生的配子大多是异常的，进而导致自然流产、死胎或胎儿畸形等，例如染色体平衡易位患者在习惯性流产夫妇中的检出率比一般群体约高10倍。染色体平衡易位导致的不孕不育可借助于第三代试管婴儿技术(植入前遗传学检测技术，即Preimplantation Genetic Testing，简写为PGT)解决。常规是通过卵胞浆内单精子显微注射技术即ICSI(Intracytoplasmic sperm injection)来完成授精，并将受精卵培养至囊胚阶段，再对囊胚滋养外胚层进行活检，取活检细胞进行染色体整倍性检测(基于二代DNA测序等技术)，选择染色体整倍性且形态学评分高的囊胚进行移植。对于行PGT的染色体平衡易位患者而言，其染色体整倍性囊胚的质量评估主要是基于传统形态学的评估方法。

在辅助生殖技术实施过程中如何筛选高质量胚胎进行移植是胚胎学家要面临的重要问题，因为移植胚胎的质量即胚胎的发育潜能将直接影响辅助生殖的临床结局，因此构建简便可靠和准确安全的胚胎发育潜能评估方法十分关键。胚胎形态学评估方法是目前临床上广泛采用的胚胎质量评估方法，该方法是根据特定时间点的胚胎形态来对胚胎进行评级和选择的，具有快速简便、无创高效等特点。形态学评分主要是根据胚胎原核的数目和形态，卵裂球数量、均一性，胚胎色泽与胞质形态，透明带与卵周隙状态，囊胚的扩张状态，内细胞团和滋养层的发育等来评价胚胎发育潜能的，现行的形态学评分标准主要采用的是伊斯坦布尔共识、Gardner评分标准和相关的专家共识。然而胚胎的形态学评估仅是基于特定发育时间点的胚胎形态观察，不能获得胚胎发育的全部信息；此外会受到观察人员主观因素影响，重复性不好；再者胚胎质量与形态学没有必然的相关性，形态学评分无法十分准确可靠地反映胚胎的发育潜能，对于有遗传物质缺陷如染色体非整倍体的胚胎难以有效辨别；进一步地，形态学评分无法对形态相近胚胎的发育潜能进行细分，因此单纯应用胚胎形态学方法评估胚胎发育潜能存在缺陷。