[发明专利]一种黑皮果蔗脱毒的组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.一种黑皮果蔗脱毒的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下操作步骤：

S1：外植体的选择与处理阶段：

S11：选取田间健壮带芽的茎秆，洗净，水中浸泡20min，埋入装有泥炭土的框中，放入人工气候箱中38℃温热处理，待腋芽长8~10cm，可取用

S12：取黑皮果蔗幼嫩腋芽作为外植体，将人工气候箱中的幼嫩腋芽切下，然后在超净台上，用75%的酒精溶液浸泡30s，再浸入0.1%升汞溶液12~15min，用无菌水冲洗5~7次，每次1min，沥干水分；

S2：培养阶段：

S21：取处理好的黑皮果蔗幼嫩腋芽的茎尖分生组织0.8~1.5mm，放入初代培养基中培养，培养温度为25~28℃，在自然散射光下培养，期间每10d更换一次新鲜培养基，防止褐化，提高无菌株系获得率；

S22：待丛生芽产生后，将这些芽送到植株病毒检测中心检测，经过检验证明植株不带病毒，即可取其做下一步的增殖培养；

S23：将得到的丛生芽接种到增殖培养基中进行增殖，培养温度为25~28℃，光照1000~1500lx，光照10~12h/d，20d后可形成由3~5个芽组成的丛生芽，再把其分割成2或3个为一丛的丛芽转接到芽增殖培养基中进行继代培养，每14~18天做一次继代，待芽长到4~8cm后，移到生根诱导培养基上进行生根培养；

S24：将上述步骤中得到的高4~8cm的丛生芽接种到生根培养基，在11~16天会长出完整根系，植株不断长高，待到幼苗长高至7~10cm，并有完整根系时，即可炼苗，后出瓶进行移栽；

S3：炼苗移栽阶段：

当培养瓶内组培苗长高至7~10cm，并有较多生长旺盛的白根时，把生根苗移到自然光下炼苗5~8d，即可出瓶，取出生根苗，将附着在其根部的培养基洗净，后浸泡在0.3%多菌灵溶液中3~4min，防止移栽后根部长菌，影响黑皮果蔗的生长，将处理好的黑皮果蔗苗种于疏松透气的苗床上，在移栽过程中，附着在大苗基部的小苗无需去除，这样更利于成活，假植时按照3cm*5cm的株行距栽种，每丛苗数量在4~6，定植后浇足定根水，移栽前期，要将环境的空气湿度保持在80%~90%之间，遮光率为50%~60%，环境温度控制在22~25℃之间，假植20~25d后，苗高在13~15cm时便可分单株。

2.根据权利要求1所述的一种黑皮果蔗脱毒的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述的初代培养基为：MS+KT0.5~0.8mg/L+NAA0.1~0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L。

3.根据权利要求1所述的一种黑皮果蔗脱毒的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述的增殖培养基为：MS+6-BA1.0~1.5mg/L+KT0.5~0.8mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。

4.根据权利要求1所述的一种黑皮果蔗脱毒的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述的生根培养基为：MS+NAA0.5~1.0mg/L+IBA1.5~2.0+MET1.0mg/L+1%活性炭+蔗糖50g/L+卡拉胶6g/L。