[发明专利]一种基于微电极的肿瘤标志物快速高灵敏检测方法

权利要求书

1.一种基于微电极的肿瘤标志物快速高灵敏检测方法，其特征在于，所述肿瘤标志物为CEA，所述检测方法包括以下步骤：

步骤1、制作裸电极

先将铂丝、金丝、银丝或碳纤维与铜丝相连，然后铜丝朝上整体插入毛细玻璃管内并将毛细玻璃管的上端封闭，之后将毛细玻璃管与铂丝、金丝、银丝或碳纤维融合并将毛细玻璃管的下端磨平，最后清洗干净并室温晾干，得到裸电极；

步骤2、在裸电极表面沉积金纳米颗粒

通过恒电流法在裸电极表面沉积金纳米颗粒，得到Au-裸电极；

步骤3、合成CEA aptamer并在末端修饰巯基

经巯基修饰的CEA aptamer的序列为：HS-C6-AAAAAAA TACCAGCTTATTCAATT；

步骤4、将经巯基修饰的CEA aptamer结合至Au-裸电极表面

取经巯基修饰的CEA aptamer，加入适量PBS溶液，95℃变性5min，迅速冷却，待CEAaptamer冷却至室温时，取20μL与Au-裸电极室温孵育，得到CEA aptamer-Au-裸电极；

步骤5、绘制标准曲线

将前面制作得到的CEA aptamer-Au-裸电极与不同浓度的CEA室温孵育，测定孵育前后的方波伏安曲线，计算峰电流变化结果，以CEA的浓度为横坐标，以峰电流变化为纵坐标，绘制标准曲线；

步骤6、用CEA aptamer-Au-裸电极检测临床样本

取微小体积临床血清样本，与CEA aptamer-Au-裸电极室温孵育，通过方波伏安法检测CEA aptamer-Au-裸电极捕获CEA前后峰电流值的变化，根据前面绘制得到的标准曲线确定样本中CEA的含量。

2.根据权利要求1所述的基于微电极的肿瘤标志物快速高灵敏检测方法，其特征在于，在步骤1中，所述铂丝、金丝、银丝和碳纤维的直径为21.3μm。

3.根据权利要求1所述的基于微电极的肿瘤标志物快速高灵敏检测方法，其特征在于，在步骤1中，所述铂丝、金丝、银丝和碳纤维通过石墨填充型导电胶与铜丝相连。

4.根据权利要求1所述的基于微电极的肿瘤标志物快速高灵敏检测方法，其特征在于，在步骤1中，所述毛细玻璃管的上端通过环氧树脂胶封闭。

5.根据权利要求1所述的基于微电极的肿瘤标志物快速高灵敏检测方法，其特征在于，在步骤2中，沉积溶液为氯金酸溶液，浓度为1μM，电流大小为5nA，沉积时间为200s。

6.根据权利要求1所述的基于微电极的肿瘤标志物快速高灵敏检测方法，其特征在于，在步骤4中，所述CEA aptamer的孵育浓度为10^-7M。

7.根据权利要求1所述的基于微电极的肿瘤标志物快速高灵敏检测方法，其特征在于，在步骤4中，所述CEA aptamer的孵育时间为1h。

8.根据权利要求1所述的基于微电极的肿瘤标志物快速高灵敏检测方法，其特征在于，在步骤6中，所述临床血清样本的取用量为20μL。

9.根据权利要求1所述的基于微电极的肿瘤标志物快速高灵敏检测方法，其特征在于，在步骤6中，所述临床血清样本与CEA aptamer-Au-裸电极的孵育时间为1h。