[发明专利]一种液相色谱串联质谱法同时检测保健食品中雄激素化合物的方法

说明书

本发明公开了一种液相色谱串联质谱法测定保健食品中雄激素化合物的方法，属于保健食品安全检测技术领域。包括以下步骤(1)超声提取；(2)涡旋离心萃取；(3)液相色谱‑串联质谱检测。本发明以乙腈为提取溶剂，涡旋，离心萃取，将保健食品中的雄激素化合物富集到有机相溶液中，之后上清液经氮吹浓缩后用乙腈复溶，利用液相色谱‑串联质谱多反应监测模式检测，内标法定量。该方法操作简便，灵敏度高，能同时检测保健食品中10种雄激素化合物。

技术领域

本发明属于保健食品质量安全检测技术领域，涉及一种液相色谱串联质谱法同时检测保健食品中雄激素化合物的方法。

背景技术

雄激素化合物(雄激素)为十九碳类固醇激素，主要产生于雄性动物睾丸中或少许分泌于雄性动物的肾上腺皮质上。在哺乳动物中，雄激素主要作用于雄性器官，以维持性功能和促进动物生长发育、维持性功能和第二性征，具有一定的蛋白质同化作用。雄激素受脑垂体和下丘脑调节，二者相互联系、相互制约，共同调节并控制动物生殖活动。除此之外，雄激素还能够明显地加速全身各种蛋白质的合成，能使肌肉发达，增加体重；同时减少氨基酸分解，使尿素生成减少减轻氮质血症。雄激素在动物界中广泛分布，激素以睾酮、雄烯二酮等为主要代表，此外还有部分人工合成的酯化、甲氧基化或氟取代的衍生物较为常见。

保健食品，是指具有特定保健功能或能补充维生素、矿物质的食品，适宜于特定人群食用，不以治疗疾病为目的，不对人体产生任何急性、亚急性或慢性危害。不法商贩为了达到其宣称的保健功效，在保健食品中非法添加化学药物，不可避免地会危害人体健康。近年来出现了许多增强体力、改善生长发育类的保健食品，除了添加以西地那非为代表的磷酸二酯酶5抑制剂以外，添加雄性激素类药物的情况也时有发生。

雄激素及同化激素类药物可促进机体内脂肪的堆积，导致机体内脂肪重新分布、血脂升高，造成向心性肥胖，严重者可以诱发心血管疾病；摄入的食品中含雄激素及同化激素残留，长期以往可产生负反馈作用等，造成机体的正常生理水平失衡而呈现不良后果，严重者可发生心率衰竭等病症：除此之外，该类激素过多可造成内分泌系统相关肿瘤、生长发育障碍、出生缺陷、生育缺陷及不孕不育等，给人体健康及人类繁衍带来不良影响。

保健食品基质相对复杂，且雄激素残留量极低，因此对雄激素残留的检测方法、灵敏度等均有较高要求。

发明内容

针对现有技术的问题，本发明提供了一种快速、简便、灵敏度高的保健食品中雄激素化合物的测定方法，以实现保健食品中雄激素的同时定性及定量检测。

为实现以上目的，技术方案如下：

一种液相色谱串联质谱法同时检测保健食品中雄激素化合物的方法，包括以下步骤：

(1)提取：向待测样品中加入同位素内标混合溶液和乙腈后，超声提取。

(2)涡旋离心萃取：样品液涡旋混合后离心，取上层乙腈溶液，加热氮吹浓缩至一定体积，加乙腈定容。

(3)液相色谱串联质谱检测：定容后的溶液经0.22μm有机滤膜过滤后，进行液相色谱串联质谱检测，绘制标准工作曲线，内标法定量，根据峰面积计算雄激素的浓度。

进一步地，雄激素化合物碳原子数为19个的类固醇激素。

进一步地，所述雄激素化合物为1,4-雄烯二酮、17α-群勃龙、群勃龙、雄烯二酮、诺龙、勃地酮、17α-勃地酮、睾酮、甲睾酮和司坦唑醇。

进一步地，步骤(1)包括：

口服液：量取待测口服液于离心管中，加入1μg/mL的同位素内标混合溶液50μL，加乙腈9mL，超声混合10-15min；

片剂、胶囊：称取试样于离心管中，加入1μg/mL的同位素内标混合溶液50μL，加乙腈10mL，超声混合10-15min。