[发明专利]一种细胞保存液及其制备方法与应用

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种细胞保存液及其制备方法与应用。所述细胞保存液包括醇、酸、缓冲盐、离子强度维持剂、抗氧化剂和蛋白水解酶；所述细胞保存液通过添加蛋白水解酶，可以较好地处理多粘液和血细胞的样本，提高薄层液基细胞学检测的染色效果；但是蛋白水解酶会影响还原兰组织细胞染色效果，通过添加抗氧化剂，降低了蛋白水解酶对还原兰组织细胞染色的影响，同时，提高了免疫细胞化学染色和还原兰组织细胞染色的准确性和稳定性，并且，所述细胞保存液保存细胞样本后对HPV检测的准确性和稳定性无影响。即所述细胞保存液能同时满足薄层液基细胞学检测、HPV检测、免疫细胞化学染色和还原兰组织细胞染色四种筛查方法。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种细胞保存液及其制备方法与应用。

背景技术

目前，宫颈癌是女性癌症中最常见的恶性肿瘤之一。早期诊断宫颈癌及癌前病变是提高宫颈癌治愈率及患者生存率的关键，薄层液基细胞学检测(Thin-Cytologic Test，TCT)是目前临床应用最广泛的筛查子宫颈癌的方法。薄层液基细胞学检测是以观察细胞形态结构变化来诊断临床病症的一门学科。几十年来，薄层液基细胞学检测已成为宫颈癌的大规模普查和高危人群随访观察的主要方法，使中晚期宫颈癌的发生率大幅度下降。传统的细胞学检查方法巴氏涂片法(即宫颈刮片)制成的涂片，细胞大量重叠，并且涂片存在着大量的红细胞、白细胞、粘液及脱落坏死组织等，病理医生在判读时非常困难，会出现15％～40％的假阴性率。薄层液基细胞学检测是上世纪90年代末发明的一项细胞学新技术，对宫颈癌及癌前病变诊断准确性较高，被认为是宫颈癌早期诊断、早期预防的最佳方法。随着薄层液基细胞学检测的运用日益增多，过多于依赖病理医生主观判断，使其检出率低的缺点也逐渐显现出来。所以，近几年开始衍生出新的宫颈癌筛查方法，例如：HPV检测、免疫细胞化学染色和还原兰组织细胞染色(醋酸白染色)等，能很好的弥补薄层液基细胞学检测检出率低的缺点。

用于薄层液基细胞学检测的细胞保存液普遍包含甲醛。当细胞被甲醛浸润后，细胞内主要的肽段和基本结构都会保存下来。除此之外，一些核苷酸也可能会与甲醛发生反应，而碳水化合物则不会有类似现象。甲醛可以特定地结合到某些氨基酸残基上，比如赖氨酸、酪氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺等，甚至还可能会对细胞核酸物质产生影响，从而影响HPV检测。

目前市面上也有无甲醛的保存液，但是尚无一种能同时满足薄层液基细胞学检测、HPV检测、免疫细胞化学染色和还原兰组织细胞染色四种筛查方法的保存液。

发明内容

本发明第一方面的目的，在于提供一种细胞保存液。

本发明第二方面的目的，在于提供第一方面的细胞保存液的制备方法。

本发明第三方面的目的，在于提供第一方面的细胞保存液在收集和/或保存脱落细胞中的应用。

本发明第四方面的目的，在于提供第一方面的细胞保存液在制备试剂盒中的应用。

本发明第五方面的目的，在于提供一种试剂盒。

为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供一种细胞保存液，所述细胞保存液包括：醇、酸、缓冲盐、离子强度维持剂、抗氧化剂和蛋白水解酶。

优选地，所述醇为甲醇、乙醇、正丙醇和异丙醇中的至少一种；进一步为乙醇。

优选地，所述醇的含量按体积百分比计为5％～30％；进一步为15％～20％；更进一步为15％。

优选地，所述酸为有机酸；进一步为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和己酸中的至少一种；更进一步为乙酸。

优选地，所述酸的含量按体积百分比计为5％～30％；进一步为15％～20％；更进一步为20％。

优选地，所述缓冲盐为磷酸缓冲盐、醋酸缓冲盐和柠檬酸缓冲盐中的至少一种。