[发明专利]一种基于可受力学信号调控可降解的蛋白水凝胶及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202110717780.1 | 申请日： | 2021-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN113416320B | 公开（公告）日： | 2022-03-25 |
| 发明（设计）人： | 雷海;张玉;陈惠燕;曹毅 | 申请（专利权）人： | 南京大学 |
| 主分类号： | C08J3/075 | 分类号： | C08J3/075;C08L89/00;C08L71/02;C12N15/70;C12N5/00;C07K19/00;G01L1/00;A61K9/06;A61K47/42 |
| 代理公司： | 江苏银创律师事务所 32242 | 代理人： | 何震花 |
| 地址： | 210000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 可受 力学 信号 调控 降解 蛋白 凝胶 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种基于可受力学信号调控可降解的蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）质粒的构建：在两蛋白GB1的基因序列之间插入多肽序列GPQGIWGQ，将蛋白GB1-GPQGIWGQ-GB1的基因片段通过限制性内切酶处理克隆到pQE80L载体中；
（2）蛋白的表达纯化：将步骤（1）所得质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞表达蛋白并将所得蛋白纯化；
（3）力信号调控可降解蛋白水凝胶的制备：将步骤（2）所得蛋白与多臂亲水高分子4臂-降冰片烯-聚乙二醇溶液混合，制得基于可受力学信号调控可降解性的水凝胶。
2.根据权利要求1所述的基于可受力学信号调控可降解的蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：在步骤（1）中，GB1-GPQGIWGQ-GB1的基因片段通过限制性内切酶BamHI 和 KpnI处理，pQE80L载体通过限制性内切酶BglII 和 KpnI处理，蛋白基因序列带有pQE80L载体的N-末端6×His标记。
3.根据权利要求2所述的基于可受力学信号调控可降解的蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：在步骤（2）中，蛋白表达条件为16 - 37℃，4 - 20小时，用Co2+-NTA蛋白树脂纯化，透析至1×磷酸盐缓冲液，并在使用前保存在4℃下。
4.根据权利要求1所述的基于可受力学信号调控可降解的蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：在步骤（3）中，蛋白GB1-GPQGIWGQ-GB1与4臂-降冰片烯-聚乙二醇以摩尔比2:1混合，随后加入1mg/ml的苯基(2,4,6-三甲基苯甲酰基)磷酸锂盐lap，紫外灯照射1.5小时成胶。
5.根据权利要求3所述的基于可受力学信号调控可降解的蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：在步骤（2）中，所述的1×磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为10 mM，pH为6.21 - 8.21，含137 mM NaCl和2.7 mM KCl。
6.权利要求1至5任一项所述的方法制备的基于可受力学信号调控可降解的蛋白水凝胶。
7.权利要求1至5任一项所述的方法制备的基于可受力学信号调控可降解的蛋白水凝胶在探测力学信号图案化中的应用。
8.权利要求1至5任一项所述的方法制备的基于可受力学信号调控可降解的蛋白水凝胶在药物释放中的应用。
9.权利要求1至5任一项所述的方法制备的基于可受力学信号调控可降解的蛋白水凝胶在细胞培养和释放中的应用。
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