[发明专利]一种直接转染柞蚕蛹获得重组杆状病毒的转染试剂及转染方法

权利要求书

1.一种直接转染柞蚕蛹获得重组杆状病毒的转染试剂，其特征在于，所述的转染试剂为两亲性聚合物，其为以疏水性化合物对聚乙烯亚胺进行疏水修饰的聚乙烯亚胺衍生物，结构如下式I所示：

式中R代表疏水性化合物，n代表不同分子量的聚乙烯亚胺。

2.根据权利要求1所述的直接转染柞蚕蛹获得重组杆状病毒的转染试剂，其特征在于，所述的疏水性化合物选自胆酸、油酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物和脂肪酸。

3.根据权利要求1或2所述的直接转染柞蚕蛹获得重组杆状病毒的转染试剂，其特征在于，所述的聚乙烯亚胺的分子量为1800-50000；所述聚乙烯亚胺为线性聚乙烯亚胺或支化聚乙烯亚胺。

4.根据权利要求3所述的直接转染柞蚕蛹获得重组杆状病毒的转染试剂，其特征在于，所述的转染试剂为以聚乳酸-羟基乙酸共聚物对支化聚乙烯亚胺进行疏水修饰所得到，其中聚乳酸-羟基乙酸共聚物结构如下式II所示，

式中x，y代表聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸与羟基乙酸的不同摩尔比。

5.根据权利要求4所述的直接转染柞蚕蛹获得重组杆状病毒的转染试剂，其特征在于，乳酸与羟基乙酸的摩尔比为50：50。

6.一种制备如权利要求1至5中任一项所述的直接转染柞蚕蛹获得重组杆状病毒的转染试剂的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

(1)将疏水性化合物溶于无水N，N-二甲基甲酰胺中，终浓度为10～100mg/ml，在反应液中加入N-羟基丁二酰亚胺与二环己基碳二亚胺，使两者的终浓度分别为1～10mg/ml与2～20mg/ml，搅拌3-5h充分溶解；

(2)将聚乙烯亚胺溶于无水N，N-二甲基甲酰胺中，搅拌1-2h，终浓度为10～100mg/ml；

(3)用0.45μm的滤膜过滤步骤1)中获得的疏水性化合物溶液，除去反应生成的杂质，将过滤后的溶液滴加到步骤2)中获得的聚乙烯亚胺溶液中，室温搅拌24-48h，

(4)将步骤3)中反应后的溶液用8000-14000的透析袋透析48-72h，除去N，N-二甲基甲酰胺的溶剂，将透析后的溶液过0.45μm的滤膜除去未反应的疏水性化合物；

(5)将步骤4)过滤后的溶液进行冷冻干燥，得到转染试剂，将转染试剂置于-20℃存储备用。

7.一种直接转染柞蚕蛹获得重组杆状病毒的转染方法，其特征在于，所述的转染方法包括以下步骤：

(1)分别准备DNA和待转染宿主柞蚕蛹，其中DNA为柞蚕核型多角体重组病毒杆粒DNA，待转染宿主柞蚕蛹为滞育柞蚕蛹；

(2)将步骤1)中准备的DNA加入如权利要求1至5中任一项所述的转染试剂或权利要求6所述的方法制备的转染试剂中，混匀后37℃孵育30min，得到转染试剂与DNA复合物；

(3)将转染试剂与DNA复合物注射到柞蚕蛹体内。

8.根据权利要求7所述的直接转染柞蚕蛹获得重组杆状病毒的转染方法，其特征在于，步骤2)中，DNA加入转染试剂中，DNA的终浓度为0.1-0.3mg/ml。

9.根据权利要求7或8所述的直接转染柞蚕蛹获得重组杆状病毒的转染方法，其特征在于，步骤3)中每只柞蚕蛹的转染试剂与DNA复合物的注射量为50～150μl。