[发明专利]特异性结合糖基化CEACAM5的抗体

说明书

本申请提供了特异性结合CEACAM5的抗体，其人源化抗体的制备及应用。

技术领域

本发明涉及抗体。更具体地，本申请涉及与糖基化CEACAM5特异性结合的单克隆抗体，其人源化抗体的制备及应用。

背景技术

1960s年代，Gold和Freedman首次于人结肠癌组织提取物中发现CEA抗原(CEACAM5)，并随后在结直肠癌等癌症患者外周血中检测到游离的CEA抗原。CEA抗原广泛参与细胞粘附、细胞分化、细胞增殖及细胞生存。CEA抗原广泛高表达于消化道癌症，如结直肠、食管癌、胃癌等，其作为肿瘤标志物使用已有数十年的历史。

CEACAM5(CD66e,Carcinoembryonic antigen related cell adhesionmolecule5)，是一种癌胚抗原，其属于CEA家族。CEA家族包含12个基因，均位于染色体19q13；CEACAM5是CEA家族中分子量最大的基因，表达于细胞膜(GPI锚定)并会脱落进入外周血中成为游离CEA；其由702个氨基酸组成(N-A1-B1-A2-B2-A3-B3结构域串联)，分子量约77KDa；重组表达或结直肠癌患者腹水中纯化的CEACAM5蛋白其分子量约为180KDa，表明在细胞中CEACAM5高度糖基化。

CEA家族抗原以跨膜、GPI锚定和分泌三种形式存在，其胞外区由免疫球蛋白结构域组成。胞外区包含N端结构域、A1-3结构域、B1-3结构域串联形成。CEACAM1、CEACAM5、CEACAM6、CEACAM7、CEACAM8、CEACAM18、CEACAM20、CEACAM21含N端及AB结构域；CEACAM3、CEACAM4、CEACAM19仅包含N端结构域；CEACAM16为分泌蛋白。CEACAM家族蛋白，如CEACAM1、CEACAM3、CEACAM5、CEACAM6、CEACAM8具有高度同源性，其组织分布不同，如CEACAM1主要分布于尿路上皮及肠道上皮；CEACAM6主要分布于肺泡及胆管、CEACAM8主要分布于骨髓及造血系统。

CEACAM5广泛高表达于众多癌症中，如消化道癌症(结直肠、胃癌、胰腺癌、食管癌)、肺癌、乳腺癌等，是理想的肿瘤相关抗原靶点(TAA，Tumor Associated Antigen)。靶向CEACAM5药物开发主要集中在抗体发现领域，CEA家族序列同源度较高，因此筛选特异性靶向CEACAM5抗体可能降低临床使用中副作用，从而提高治疗窗口，提高药效。

发明内容

本发明提供了一种特异性结合CEACAM5的人源化抗体，可应用于CEACAM5高表达肿瘤的治疗。

本发明的一个方面提供了针对CEACAM5的单克隆抗体抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合CEACAM5的N-A1-B1结构域而不结合A2-B2和A3-B3结构域。

在具体实施方案中，本发明的单克隆抗体包含重链可变区及轻链可变区，其中：

a.所述重链可变区包含：由SEQ ID NO:1所示的CDR-H1或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列、由SEQ ID NO:2所示的CDR-H2或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和由SEQ ID NO:3所示的CDR-H3或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；同时所述轻链可变区包含：由SEQ ID NO:4所示的CDR-L1或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列、由SEQ ID NO:5所示的CDR-L2或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和由SEQ ID NO:6所示的CDR-L3或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或