[发明专利]一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增引物、探针、试剂盒及检测方法

说明书

一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增引物，所述引物筛选自Ot1序列，所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物具有SEQ ID NO.1序列特征，所述下游引物具有SEQ IDNO.2序列特征；一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增探针，所述探针筛选自Ot1序列，所述探针(Ot‑P)具有SEQ ID NO.3序列特征；一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增试剂盒，所述试剂盒包括引物和探针；应用一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增试剂盒的检测方法，包括以下步骤：S1：处理模板；S2：将模板、冻干酶粉、引物、探针、超纯水(Ultrapure water，UP水，电阻率达到18MΩ·cm)以及激活剂进行处理并在35‑41℃下反应20‑40分钟。引物和探针特异性强、敏感性高；本发明检测时间短、不需要大型昂贵的仪器及变温系统、在37℃、30分钟可完成核酸扩增、易于现场快速核酸检测及推广。

技术领域

本发明涉及恙虫病东方体的分子生物学检测领域，特别是一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增引物、探针、试剂盒及检测方法。

背景技术

恙虫病又称为丛林斑疹伤寒，是由恙虫病东方体(Ot)经恙螨幼虫叮咬传播的一种人兽共患传染病。恙虫病患者主要临床表现发热、皮疹、焦痂或溃疡、头痛、肌肉酸痛、淋巴结肿大等。研究报道全世界每年大约有100万人感染恙虫病，近10亿人处于感染恙虫病威胁之中。2006-2016年，中国恙虫病的发病人数和发病率逐年升高，多发生于我国南方地区。恙虫病与其他发热性疾病症状和体征相似，常常被误诊，病程耽误，最终引发其他并发症如急性呼吸窘迫综合征及肾衰竭，危及患者生命安全。

目前恙虫病实验室诊断方法主要包括病原分离培养，血清免疫学检测和分子生物学检测方法。病原分离培养是恙虫病临床诊断的金标准。主要是将恙虫病患者的血液通过腹腔注射老鼠，一般7-9天后发病。病原分离培养检测准确，但其检测所需时间长、需专业的操作人员进行腹腔注射和大量的小鼠以及标准饲养环境；血清学检查方法主要针对恙虫病患者血液中抗体进行测试，具有检测延迟性的缺点。同时抗体的出现具有一段“空窗期”；分子生物学检查主要是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)及其延伸相关检测方法。PCR检测虽然灵敏，但是其检测成本较高、需要特定设备、专业的技术人员等缺陷，限制其广泛的实际应用。建立一种快速、灵敏及适合现场应用的恙虫病的检测方法意义非凡。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增引物、探针及试剂盒，检测时间短、不需要大型昂贵的仪器及变温系统、在37℃、30分钟可完成核酸扩增、易于现场快速核酸检测及推广。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增引物，所述引物筛选自Ot1序列，所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物具有SEQ ID NO.1序列特征，所述下游引物具有SEQID NO.2序列特征：

SEQ ID NO.1(7-38)：5′-AGATATATAGTGATATAAAGCCATTCGCTGAT-3′

SEQ ID NO.2(135-103)：5′-CTTCCAATAGATCGTTTAATTCTTGCATTTTAT-3′。

一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增探针，所述探针筛选自Ot1序列，所述探针具有SEQ ID NO.3序列特征，所述SEQ ID NO.3序列为：

SEQ ID NO.3：5′-AGCTGGTATTGATGTTCCTGATACTAGTT/iFAMdT/G/idSp/C/

iBHQ1dT/AATAGTGCATCTG-C3spacer-3′