[发明专利]一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增引物、探针、试剂盒及检测方法在审

申请号：	202110642084.9	申请日：	2021-06-09
公开（公告）号：	CN113186304A	公开（公告）日：	2021-07-30
发明（设计）人：	邬强;乔斌;陈倩	申请（专利权）人：	海南医学院
主分类号：	C12Q1/6888	分类号：	C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11
代理公司：	成都瑞创华盛知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 51270	代理人：	邓瑞;辜强
地址：	571199 海南省***	国省代码：	海南;46
权利要求书：	查看更多	说明书：	查看更多
摘要：
搜索关键词：	一种恙虫病东方核酸荧光等温扩增引物探针试剂盒检测方法
钻瓜网技术展会专利词库专利权人专利榜在售专利公布日期热门专利

【权利要求书】：

1.一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增引物，其特征在于：所述引物筛选自Ot1序列，所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物具有SEQ ID NO.1序列特征，所述下游引物具有SEQ ID NO.2序列特征：

SEQ ID NO.1(7-38)：5′-AGATATATAGTGATATAAAGCCATTCGCTGAT-3′

SEQ ID NO.2(135-103)：5′-CTTCCAATAGATCGTTTAATTCTTGCATTTTAT-3′。

2.一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增探针，其特征在于：所述探针筛选自Ot1序列，所述探针具有SEQ ID NO.3序列特征，所述SEQ ID NO.3序列为：

SEQ ID NO.3：5′-AGCTGGTATTGATGTTCCTGATACTAGTT/iFAMdT/G/idSp/C/

iBHQ1dT/AATAGTGCATCTG-C3spacer-3′

所述SEQ ID NO.3序列的第30位碱基T通过荧光染料修饰，所述SEQ ID NO.3序列的第34位碱基T通过荧光淬灭基团修饰，所述SEQ ID NO.3序列的第32位碱基为核酸类似物，所述SEQ ID NO.3序列的3′最后一个碱基采用阻断延伸基团修饰。

3.根据权利要求2所述的一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增探针，其特征在于：所述荧光染料为FAM、FITC、CY3、CY5、CY5.5、ROX、HEX、SYBR、JOE、VIC或TAMRA中的一种；所述荧光淬灭基团为BHQ1或BHQ2或BHQ3中的一种，所述核酸类似物为四氢呋喃，所述阻断延伸基团为C3spacer或其他如磷酸基团阻断基团。

4.一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括引物和探针；

所述引物筛选自Ot1序列，所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物具有SEQID NO.1序列特征，所述下游引物具有SEQ ID NO.2序列特征：

SEQ ID NO.1(7-38)：5′-AGATATATAGTGATATAAAGCCATTCGCTGAT-3′

SEQ ID NO.2(135-103)：5′-CTTCCAATAGATCGTTTAATTCTTGCATTTTAT-3′

所述探针筛选自Ot1序列，所述探针具有SEQ ID NO.3序列特征，所述SEQ ID NO.3序列为：

SEQ ID NO.3：5′-AGCTGGTATTGATGTTCCTGATACTAGTT/iFAMdT/G/idSp/C/

iBHQ1dT/AATAGTGCATCTG-C3spacer-3′

5.根据权利要求4所述的一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括冻干酶粉以及激活剂。

6.根据权利要求5所述的一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增试剂盒，其特征在于：所述冻干酶粉包括重组酶、聚合酶、核酸酶、单链DNA结合蛋白、dNTP以及盐离子。

7.应用权利要求4-5中任一权利要求所述的一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：处理模板；

S2：将模板、冻干酶粉、引物、探针、超纯水以及激活剂进行处理并在35-41℃下反应20-40分钟。