[发明专利]一种抗PCT的纳米抗体2G11及其应用

说明书

本发明公开了一种抗PCT的纳米抗体，所述纳米抗体具有独特的3个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3，该抗体亲和力可达到1.623E‑09，而且能够在PCT血清检测特别是双抗体夹心法中获得优异的检测效果。本发明还提供了一组用于双抗体夹心法检测PCT的纳米抗体组合以及该抗体组合在制备PCT抗原检测试剂盒中的应用，所述组合包括作为捕获抗体的抗PCT二价纳米抗体和作为检测抗体的抗PCT单价纳米抗体。

技术领域

本发明公开了一种纳米抗体，属于免疫学领域。

背景技术

PCT(Procalcitonin)是一种无激素活性的降钙素前肽物质，由降钙蛋白、降钙素、N端残基片段组成，相对分子量为13kDa。降钙素仅在甲状腺C细胞受到激素性刺激时才产生，而PCT可由很多器官的不同类型细胞在受到促炎症反应刺激特别是受到细菌引起的刺激后分泌。

PCT可作为一种能特异性区分细菌感染和其他原因导致的炎症反应的重要标志物，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时，其在血浆中的水平升高。临床资料显示，PCT浓度大于0.1ng/ml时说明存在临床相关的细菌感染，需要采用抗生素进行治疗；当PCT浓度大于0.5ng/ml时，要考虑患者可能发展成重症败血症或败血症性休克的危险。PCT反映了全身炎症反应的活跃程度。而影响PCT水平的因素包括被感染器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度和免疫反应的状况。检测病例中PCT浓度的变化，有利于判断机体细菌感染情况，评判机体健康状况，对临床和基础性研究均具有重要意义。

自上世纪80年代以后，免疫学检测技术随着单克隆抗体、人工合成多肽、基因工程表达抗原及各种标记技术的成熟而迅速发展，免疫比浊法、速率散射比浊法、胶乳增强透射比浊法与化学发光分析技术逐渐取代传统的免疫沉淀、免疫凝集物，使检测更为快捷。目前，检测PCT的方法有很多，不仅可以定性，亦可以定量。常用的方法有如下几种：

1、放射免疫学分析法：该方法利用人工合成的多克隆抗体特异性地识别和连接合成氨基酸降钙素原。该方法能检测正常人的血清PCT，敏感度可达4pm/ml，检测的是游离PCT、结合型PCT和降钙素基因相关肽前体的混合物，而不能区别上述三种物质。且该方法检测耗时19-22小时，并有放射性元素污染的风险。

2、胶体金比色法：该方法利用的是胶体金标记的抗PCT的单克隆抗体和用做包被的抗PCT多克隆抗体。当血清或者血浆加入标本孔，金标单克隆抗体与标本中的PCT结合，形成金标记的抗原抗体复合物。该复合物在反应膜上移动，与固定在膜上的抗PCT抗体结合形成更大的复合物。当PCT浓度超过0.5ng/ml，该复合物显示红色，红色的深浅与PCT的浓度成正比，与标准比色板比较即可得出PCT的浓度范围。然而此方法在颜色对比过程中容易产生较大的误差。

3、透射免疫浊度法：该方法的原理为样品中的PCT与试剂中的PCT单克隆抗体发生抗原抗体反应，使反应液浊度增加，并在一定范围内反应液浊度与所加抗原的量呈线性关系，使用生化分析仪或其他光学检测仪器在600nm波长处测定反应液吸光度值。所测吸光度值与所检测PCT浓度成正比。该方法虽然简便、快速，但免疫透射比浊的方法学及临床应用尚需进一步的验证。

4、双抗体夹心免疫化学发光法：该方法运用双单克隆抗体，其中一个抗体为降钙素抗体，另一个为抗钙素抗体，分别结合到PCT分子的降钙素和抗钙素部位，可排除交叉反应。其中一个抗体是光标记的，另一个未标记的抗体固定在反应容器的内壁，反应过程中两个抗体与PCT分子结合而形成三明治复合体，发光部位于反应容器的表面。该方法操作简便、特异性强、敏感度高，测定的底限值可达0.1ng/ml，且耗时2h。

基于PCT在临床诊断方面所表现出的突出特性，研发出针对PCT的特异性结合抗体，在保证灵敏度的同时增加检测范围成为现有技术的迫切需求。