[发明专利]DNA提取液以及革兰氏阳性菌DNA的提取方法

权利要求书

1.一种DNA提取液，其特征在于，由溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和溶液Ⅳ组成；其中，溶液Ⅰ的组成成分包括氯化钠、EDTA和Tris-HCl；

溶液Ⅱ是8％～12.5％质量体积分数的十二烷基硫酸三乙醇胺；

溶液Ⅲ是2.5～3.2mol/L氯化钾；

溶液Ⅳ是水杨酸甲酯。

2.按照权利要求1所述的DNA提取液，其特征在于，溶液Ⅰ的各成分的浓度为：氯化钠0.15～0.20mol/L，EDTA 10～20mmol/L，Tris-HCl10～20mmol/L，其中，Tris-HCl的pH值为8.5。

3.按照权利要求2所述的DNA提取液，其特征在于，溶液Ⅰ的各成分的浓度为：氯化钠0.15mol/L，EDTA 10mmol/L，Tris-HCl 15mmol/L。

4.按照权利要求1所述的DNA提取液，其特征在于，溶液Ⅱ是10％质量体积分数的十二烷基硫酸三乙醇胺；溶液Ⅲ是3mol/L氯化钾。

5.权利要求1所述的DNA提取液在提取细菌DNA中的应用。

6.按照权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的细菌是革兰氏阳性菌。

7.一种应用权利要求1所述DNA提取液提取细菌基因组DNA的方法，其特征在于，包括：

(1)用无菌蒸馏水重悬培养物中的革兰氏阳性菌菌体，离心，弃去上清收集菌体；

(2)向溶液Ⅰ中加入溶菌酶后重悬所收集的菌体，静置；

(3)加入溶液Ⅱ颠倒混匀，静置；

(4)加入冰浴的溶液Ⅲ，混匀后离心，取上清加入溶液Ⅳ，震荡混匀至乳状，离心；

(5)取上层水相加入等体积异丙醇沉淀，离心，收集沉淀；

(6)用乙醇洗涤沉淀，离心，弃去乙醇，晾干沉淀，用TE溶解沉淀，即得。

8.按照权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的离心的转速为8000-12000rpm，离心的时间为0.5-2min；优选的，所述的离心转速是10000rpm，离心时间是1min；

步骤(2)中向溶液Ⅰ中加入溶菌酶至溶菌酶的浓度为5mg/ml；步骤(2)中所述的静置优选在37℃的温度下静置；

步骤(3)中所述的静置在室温的温度下静置，所述的静置时间为10min；

步骤(4)中所述离心的转速为10000～11000rpm，离心时间为2～4min。

9.按照权利要求7所述的方法，其特征在于，按体积比计，溶液Ⅰ：溶液Ⅰ：溶液Ⅲ：溶液Ⅳ＝9:1:5：10。

10.按照权利要求7所述的方法，步骤(6)中用70％乙醇洗涤沉淀，所述的离心为10000rpm离心1min。