[发明专利]一种基于蚯蚓体腔液的生物传感器及其在检测四环素类抗生素中的应用和检测方法

权利要求书

1.一种蚯蚓体腔液在四环素类抗生素检测中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蚯蚓体腔液为荧光物质，且会在四环素类抗生素的作用下发生猝灭。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述四环素类抗生素为四环素、金霉素、土霉素或强力霉素。

4.一种蚯蚓体腔液的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将10～20％乙醇、0.01～0.1MPBS缓冲液和2.0～3.0g/L的EDTA混合，配制得到刺激液；

(2)将蚯蚓称重洗涤擦干后，置于刺激液中，收集蚯蚓排出的体腔液并于-80℃冷冻保存备用。

5.一种用于四环素类抗生素检测的生物传感器，其特征在于，其是基于蚯蚓体腔液制备而成。

6.一种通过蚯蚓体腔液检测四环素类抗生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将待检样品预处理，以8000～10000r/min离心后收集上清液，然后加入四环素类抗生素溶液；

(2)将权4或权5的蚯蚓体腔液以8000～10000r/min离心10～15min，收集上清液，然后将其与步骤(1)加标后的溶液等体积混合，孵育1～5min后，于370nm的激发条件下测定荧光光谱，记录位于520nm处的荧光强度，并计算相对荧光强度；

(3)然后根据构建的标准曲线和线性方程，即可计算出待检样品中四环素类抗生素的加标回收浓度。

7.根据权利要求6所述的通过蚯蚓体腔液检测四环素类抗生素的方法，其特征在于，所述标准曲线的构建过程如下：

(1)配置浓度为250μmol/L的四环素类抗生素标准溶液，用pH值为7.2～7.4的PBS缓冲液和双蒸水将四环素类抗生素稀释为0.5μmol/L、0.75μmol/L、1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、7.5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L，以及75μmol/L；

(2)取出-80℃冷冻备用的蚯蚓体腔液，10000r/min的条件下离心10min，随后收集上层溶液作为蚯蚓体腔液检测液；

(3)分别将1mL上述不同浓度的四环素类抗生素溶液与1mL蚯蚓体腔液检测液混合摇匀；

(4)选择在370nm的激发下测定蚯蚓体腔液检测液和不同浓度四环素类抗生素反应后的荧光光谱，记录位于520nm处的荧光强度，根据计算加入的四环素类抗生素浓度的含量和相对应光强度变化值之间的关系建立四环素类抗生素检测的标准曲线，得到蚯蚓荧光检测四环素类抗生素体系的检测范围及线性方程。