[发明专利]一种口蹄疫O型PanAsia-2谱系储备疫苗毒株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种口蹄疫O型PanAsia-2谱系储备疫苗毒株rHN/TUR09/VP1，其特征在于，以口蹄疫病毒O/HN/CHA/93为骨架，嵌合了口蹄疫疫苗株O/TUR/5/2009的VP1基因所得；

所述口蹄疫疫苗株O/TUR/5/2009的VP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.权利要求1所述口蹄疫O型PanAsia-2谱系储备疫苗毒株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）以半长质粒pSK-Z123为骨架，人工合成含FMDV O/TUR/5/2009 VP1基因的重组质粒，记为重组质粒pSK-Z123/TUR09VP1；

2）将步骤1）中所述重组质粒pSK-Z123/TUR09VP1用Spe I/Bgl II酶切，将得到的5400bp的目标条带插入质粒pOFS中，得到重组质粒pOFS-TUR09/VP1；

3）将步骤2）中所述重组质粒pOFS-TUR09/VP1转染细胞，拯救病毒，得到rHN/TUR09/VP1；

步骤1）中FMDV O/TUR/5/2009 VP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，步骤2）中Spe I/Bgl II双酶切的体系如下：

10× Buffer H 10 μL、BglⅡ4 μL、Spe Ⅰ4 μL、质粒 4 μg、ddH₂O补充至100 μL；

酶切条件为在37 ℃条件下孵育1h~2 h。

4.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，步骤3）中在所述转染细胞前，对所述重组质粒pOFS-TUR09/VP1进行鉴定。

5.根据权利要求4所述构建方法，其特征在于，所述鉴定的方法采用Bgl II和Not I酶对所述重组质粒pOFS-TUR09/VP1进行酶切，酶切出8400bp和3000bp两个条带，说明重组质粒pOFS-TUR09/VP1包含了FMDV O/TUR/5/2009毒株的VP1基因。

6.权利要求1所述口蹄疫O型PanAsia-2谱系储备疫苗毒株rHN/TUR09/VP1或权利要求2~5中任意一项所述构建方法构建得到的O型口蹄疫病毒株rHN/TUR09/VP1在制备口蹄疫O型PanAsia-2谱系储备疫苗中的应用。

7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述口蹄疫O型PanAsia-2系储备疫苗的防控对象为PanAsia谱系、Ind-2001谱系、Mya98谱系和Cathay谱系病毒株。

8.一种口蹄疫O型PanAsia-2谱系储备疫苗，其特征在于，包括权利要求1所述口蹄疫O型PanAsia-2谱系储备疫苗毒株rHN/TUR09/VP1或权利要求2~5中任意一项所述构建方法构建得到的O型口蹄疫病毒株rHN/TUR09/VP1。