[发明专利]微生物发酵法制备D-丙氨酸的方法

权利要求书

1.一株生产D-丙氨酸的基因工程菌，其特征在于，所述工程菌以谷氨酸棒杆菌ATCC13032为出发菌株，通过敲除丙氨酸消旋酶基因alr和L-丙氨酸转氨酶alaT；过表达meso-二氨基庚二酸脱氢酶编码基因；敲除iolR阻遏蛋白基因同时基因组整合表达葡萄糖激酶基因glk1；整合来自大肠杆菌的edd和eda基因获得；

所述meso-DAPDH编码基因如序列表SEQ ID NO.1所示；

所述glk1基因Gene ID为58308863；所述edd基因的Gene ID为946362；所述eda基因的Gene ID为946367；

所述meso-DAPDH编码基因、edd和eda基因使用SEQ ID NO.5所示的Ptuf启动子进行表达；

所述glk1基因使用SEQ ID NO.6所示的Psod启动子进行表达。

2.如权利要求1所述的一株生产D-丙氨酸的基因工程菌，其特征在于，meso-二氨基庚二酸脱氢酶编码基因通过pXtuf质粒进行过表达，所述pXtuf质粒是通过将pXMJ19质粒自身Ptac启动子替换为SEQ ID NO.5所示的Ptuf启动子所得。

3.权利要求1所述基因工程菌在发酵法生产D-丙氨酸中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，发酵方法如下：将活化后的菌种接入种子培养基中，32℃培养至OD为20-30时，按照20％的接种量，接入发酵培养基，在pH 6.7-7.2、温度32-34℃、溶氧10-40％的条件下发酵培养30-48h。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，种子培养基组成为：葡萄糖40-60g/L，KH₂PO₄2-3g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2-2g/L，MnSO₄·H₂O 10-20mg/L，FeSO₄10-20mg/L，V_B1 0.5mg/L，VH0.1mg/L，酵母粉5-7g/L，蛋氨酸0.3-0.5g/L，玉米浆20-30g/L，豆粕水解液20-30mL/L，消泡剂2滴，其余为水，pH 7.0-7.2；

发酵培养基组成为：葡萄糖60g-70g/L，KH₂PO₄ 2.5-3.5g/L，MgSO₄·7H₂O1.6-2g/L，MnSO₄·H₂O 10-20mg/L，FeSO₄ 10-20mg/L，V_B1 0.5mg/L，VH 0.05-0.1mg/L，谷氨酸2-4g/L，蛋氨酸0.3-0.5g/L，玉米浆20-30g/L，豆粕水解液20-30mL/L，消泡剂2滴，其余为水，pH7.0-7.2。