[发明专利]提高雨生红球藻静置培养细胞浓度的方法

说明书

本发明公开了一种提高雨生红球藻静置培养细胞浓度的方法，包括以下步骤：S1、向藻种中加入培养基后分装至培养瓶中，在光照条件下静置培养至其中无游动细胞和分裂细胞，得不动细胞，其中，培养瓶的体积为100～250mL；S2、将不动细胞转移至光照强度0.1μmol/m²/s，温度为10～25℃环境中，培养至镜检至少70％的不动细胞中心变黄或变红；S3、将培养瓶内藻液摇匀，在光照条件下培养获得多分裂细胞，继而释放出游动细胞。本发明具有提高雨生红球藻静置培养细胞浓度的有益效果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域。更具体地说，本发明涉及一种提高雨生红球藻静置培养细胞浓度的方法。

背景技术

虾青素是一种酮式类胡萝卜素，化学名为3,3′-二羟基-4,4′-二酮基-β,β′-胡萝卜素，具有强大的抗氧化能力，其清除自由基的能力是维生素C的6000倍、β-胡萝卜素的110倍、番茄红素的1800倍、叶黄素的800倍、茶多酚的320倍，具有很高的营养和药用价值，广泛应用于食品、保健品、饲料、化妆品等领域。雨生红球藻的虾青素含量可达1.5％～6％，被认为是目前含量最高的天然虾青素来源，而且雨生红球藻所含虾青素及其酯类的配比为约70％的单酯，25％的双酯及5％的单体，这与水产养殖动物自身的配比极为相似，这是通过化学合成和利用红发夫酵母等生产的虾青素所不具备的优势，因此，雨生红球藻成为近年来国际上天然虾青素生产的研究热点。

雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)是属于绿藻门、团藻目、红球藻科的一种单细胞真核生物，雨生红球藻的生命周期比较复杂，在不同的环境条件下具有不同的细胞形态，在生长环境比较适合的时候(营养充足、温度和光照合适等)，藻细胞以绿色游动细胞存在，当环境条件变差时，绿色游动细胞失去鞭毛，变成绿色不动细胞，当环境条件继续变差，绿色不动细胞内积累虾青素朝不动孢子转变，最后变成含有大量虾青素的红色不动孢子。然而，当外界环境条件变好时，即外界环境适合藻细胞生长时，不动孢子又会转变成绿色游动细胞。

雨生红球藻的规模化养殖通常采用两步法进行，即营养生长分裂繁殖细胞和营养缺失诱导产虾青素，在放大培养前藻种的筛选、初步扩培及短时间保存一般均采用固体平板和培养瓶静置培养。目前，针对雨生红球藻的研究主要集中在营养生长阶段和诱导阶段如何提高产量或产率，而针对小体积培养瓶(100～250mL)种子静置培养进行初步扩培阶段的研究甚少。

目前，雨生红球藻小体积培养瓶静置培养后期由于藻液pH值升高，生长环境变不利，藻细胞失去鞭毛，变成绿色不动细胞，或藻细胞内积累虾青素朝不动孢子转变，不再进行分裂增殖，使得静置培养阶段存在培养周期长且细胞浓度低的问题，因此，如果能够开发一种可以快速促进雨生红球藻小体积培养瓶静置培养阶段不动细胞或不动孢子多分裂的方法，将会很大幅度的提高静置培养阶段种子浓度，从而提高生产效率。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种提高雨生红球藻静置培养细胞浓度的方法，其能够提高雨生红球藻静置培养细胞浓度。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种提高雨生红球藻静置培养细胞浓度的方法，包括以下步骤：

S1、向藻种中加入培养基后分装至培养瓶中，在光照条件下静置培养至其中无游动细胞和分裂细胞，得不动细胞，其中，培养瓶的体积为100～250mL；

S2、将不动细胞转移至光照强度0.1μmol/m²/s，温度为10～25℃环境中，培养至镜检至少70％的不动细胞中心变黄或变红；

S3、将培养瓶内藻液摇匀，在光照条件下培养获得多分裂细胞，继而释放出游动细胞。

优选的是，步骤S1中所述藻种为雨生红球藻固体平板单藻斑、雨生红球藻游动细胞、雨生红球藻不动细胞中的一种。