[发明专利]一种近红外荧光微球免疫层析试纸条快速检测方法

说明书

本发明提供一种牛奶中常见抗生素的近红外荧光微球免疫层析试纸条快速检测方法，包括以下步骤，S1：预备PVC底板以及2mm重叠粘贴在底板上的样品垫、硝酸纤维素膜、吸水纸；样品垫通过样品垫稀释液进行处理，所述硝酸纤维素膜上包被有抗生素的人工抗原作为检测线和包被有羊抗兔抗体作为质控线；S2：将近红外荧光微球分别与磺胺单克隆抗体、喹诺酮单克隆抗体、林可霉素单克隆抗体及兔抗羊抗体偶联，本申请可以有效改进免疫层析试纸条系统，获得灵敏度高、稳定性好、成本低、可用于现场快速测定牛奶中的磺胺、喹诺酮、林可霉素的检测方法。

[技术领域]

本发明涉及食品安全免疫检测技术领域，涉及一种磺胺、喹诺酮、林可霉素多残留的近红外荧光微球免疫层析试纸条快速检测方法。

[背景技术]

磺胺是以对氨基苯磺酰胺为基本结构的一类成分的总称，磺胺类药物是其合成衍生物，为第一类人工合成抗菌药，广泛用于畜牧养殖。食品中常检出的磺胺类药物有20余种。磺胺类药物的抑菌效果早在20世纪40年代就被发现，成为畜禽细菌感染的有效治疗方法，其主要在细菌核蛋白合成时通过与对氨基苯甲酸竞争性结合二氢叶酸合成酶而发挥抑菌作用，对革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌以及多种病菌球虫都有良好的杀灭效果。正因为磺胺类药物抗菌效果的广谱性、价格低廉，目前在畜牧养殖业中已有众多磺胺类衍生药物的应用。近年来，磺胺类药物的残留现象比较严重。鉴于此，我国与欧盟规定畜禽产品中最高残留限量为100ng/g，美国规定限量为10ng/g。

喹诺酮类药物又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是一种合成抗菌药物。喹诺酮类药物特别是氟喹诺酮类抗生素的发展已有50多年的历史，已被广泛用于预防和治疗人类和动物疾病。喹诺酮类是一种广谱合成抗菌剂，用于家畜和水产养殖，喹诺酮类药物的残留近年来引起国内外的广泛注意，基于此，各国对家畜产品中的二氟沙星、恩诺沙星等喹诺酮类药物残留有明确限定。其中，我国和欧盟对喹诺酮类药物残留的最大的残留限量为10ng/g。

林可霉素对肺炎球菌等革兰氏阳性菌有效，对革兰氏阴性菌无效，能够抑制肽酰基转移酶，阻止核糖体的合成，造成细菌的死亡。林可霉素虽不具有显著毒性，然而它在食品中的残留会引起微生物耐药性的产生。因此林可霉素药物的残留情况已得到许多国家的关注。欧盟与我国规定牛奶中的林可霉素最大残留限量为150μg/kg，瑞士、英国和比利时等一些国家规定林可霉素的最大残留限量为10-50μg/kg。

耐药性是一个日益严重的问题，磺胺类、喹诺酮类及林可霉素类药物会使沙门氏菌、大肠杆菌等细菌的耐药性增加，从而降低药物的效用。除此之外，喹诺酮类药物会引起过敏反应，对中枢神经系统等造成损害。尽管国内外对于三种抗生素的残留均有限量标准，但由于盲目追求经济效益导致超剂量、超范围使用和不遵守休药期等药物滥用现象迭出，乳及乳制品中磺胺类药物残留超标问题时有发生，因此对于牛奶中三种抗生素的残留非常重要。

仪器分析法是目前抗生素类药物残留检测的金标准，包括液相色谱-质谱联用(LC-MS)方法，仪器分析法灵敏度高、特异性好、分离能力强、测定结果准确可靠，可将多组分混合物进行分离和分析。但是该方法依赖昂贵的仪器设备、复杂的前处理过程和专业的操作人员等，因此很难实现现场快速检测。近年来，免疫分析法是基于抗原抗体的特异性反应进行检测的技术，由于特异性好、方便快捷，已经越来越多的被引入到现场检测。免疫分析法主要包括酶联免疫吸附技术(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)和免疫侧流层析技术等，ELISA较仪器分析法操作更简单便捷，可以定性和定量分析，且具有回收率好、特异性强等优点，因此得到了广泛应用，但该方法仍需要熟练的技术操作人员，在现场快速检测中仍受到限制。免疫侧流层析技术操作简单便捷、成本低廉、无需复杂仪器设备和专业人员，被广泛应用于食品安全中兽药残留的检测。但是目前已报道的免疫层析试纸条检测灵敏度较低，且多以检测单种抗生素为主，不能同时对多种抗生素进行检测。

[发明内容]

为克服现有技术所存在的问题，本发明提供一种磺胺、喹诺酮、林可霉素多残留的近红外荧光微球免疫层析试纸条快速检测方法。