[发明专利]以溶酶体的代谢物为标志物进行溶酶体分类的方法

权利要求书

1.一种以溶酶体的代谢物为标志物进行溶酶体分类的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、采用单溶酶体膜片钳技术处理细胞，获得单溶酶体的内容物；

步骤二、对单溶酶体的内容物进行质谱检测；

步骤三、根据步骤二检测的结果，以内容物中的代谢物为对象，进行溶酶体的分类；

所述步骤三中的溶酶体被分为五个亚群；

所述五个亚群分别为第一亚群、第二亚群、第三亚群、第四亚群、第五亚群；其中，

第一亚群对应的标志性代谢物包括精氨酸、赖氨酸、组氨酸阳离子氨基酸，第二亚群对应的标志性代谢物包括氧化己二酸、烟尿酸和香草扁桃酸氨基酸衍生物，第三亚群对应的标志性代谢物包括甘油三酯、磷脂酰胆碱、甘油三酯和甘油二酯，第四亚群对应的标志性代谢物包括丁基肉碱，乙酰肉碱和马来酸均聚物，第五亚群对应的标志性代谢物包括磷脂酰肌醇双磷酸、双磷脂酰甘油、和甘油三酯；

所述第三亚群中的一个甘油三酯中烷基链中碳原子的个数为68，双键当量即双键数为8，所述第三亚群中的另一个甘油三酯中烷基链中碳原子的个数为62，双键当量即双键数为10，所述第五亚群中甘油三酯的烷基链中碳原子的个数为31，双键当量即双键数为0。

2.根据权利要求1所述的以溶酶体的代谢物为标志物进行溶酶体分类的方法，其特征在于，所述步骤一中的细胞为HEK-293T细胞、小鼠肺成纤维细胞、膀胱癌细胞、人膀胱上皮永生化细胞、BxPC-3细胞、小鼠心肌细胞、小鼠大脑皮层神经元、神经胶质细胞、小鼠腹腔巨噬细胞、小鼠胚胎成纤维细胞、小鼠淋巴成纤维细胞的至少一种。

3.根据权利要求1所述的以溶酶体的代谢物为标志物进行溶酶体分类的方法，其特征在于，所述五个亚群中存在一个亚群标记为内吞溶酶体，存在另一个亚群标记为自噬溶酶体。

4.根据权利要求1所述的以溶酶体的代谢物为标志物进行溶酶体分类的方法，其特征在于，所述步骤一中的所述单溶酶体膜片钳技术采用的电极其电极尖端长度为5-10mm，电极尖端开口直径为0.1-2μm。

5.根据权利要求1所述的以溶酶体的代谢物为标志物进行溶酶体分类的方法，其特征在于，在进行所述步骤一时，还获得单溶酶体的电生理信号。

6.根据权利要求1所述的以溶酶体的代谢物为标志物进行溶酶体分类的方法，其特征在于，步骤一中，在采用单溶酶体膜片钳技术的玻璃电极对单溶酶体处理之前，进行溶酶体的增大处理。

7.一种单溶酶体代谢物信息的获取方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、培养细胞；

步骤二、将培养后的细胞进行转染；

步骤三、通过单溶酶体膜片钳技术获取细胞中单溶酶体的电生理信号并获得单溶酶体的内容物；

步骤四、通过质谱检测对内容物的成分进行定性定量分析，获取单溶酶体中代谢物信息；

所述溶酶体分为五个亚群；

所述五个亚群分别为第一亚群、第二亚群、第三亚群、第四亚群、第五亚群；其中，

第一亚群对应的标志性代谢物包括精氨酸、赖氨酸、组氨酸阳离子氨基酸，第二亚群对应的标志性代谢物包括氧化己二酸、烟尿酸和香草扁桃酸氨基酸衍生物，第三亚群对应的标志性代谢物包括甘油三酯、磷脂酰胆碱、甘油三酯和甘油二酯，第四亚群对应的标志性代谢物包括丁基肉碱，乙酰肉碱和马来酸均聚物，第五亚群对应的标志性代谢物包括磷脂酰肌醇双磷酸、双磷脂酰甘油、和甘油三酯；

所述第三亚群中的一个甘油三酯中烷基链中碳原子的个数为68，双键当量即双键数为8，所述第三亚群中的另一个甘油三酯中烷基链中碳原子的个数为62，双键当量即双键数为10，所述第五亚群中甘油三酯的烷基链中碳原子的个数为31，双键当量即双键数为0。