[发明专利]一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法

说明书

本发明公开了一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法，属于生物医学领域。一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒，包括：用于检测泛素结合酶抗体的溶液；所述溶液包含用于标记泛素结合酶抗体的活性酯和非放射性溶液。所述活性酯包括硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯。所述试剂盒还包括96孔平板、链霉亲和素石墨烯平板、0.01mol/L的PBS溶液、5％的BSA溶液和PBST溶液。所述链霉亲和素石墨烯平板为链霉素标记的MSD96孔板。与现有技术相比，本申请的试剂盒具有较高的灵敏度和特异性，无放射物质使用，操作简便，能检测微量血清中的抗体量，具有很好的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法。

背景技术

经典T1DM是一种抗原特异性T细胞介导的特异性损伤胰岛β细胞的自身免疫性疾病，胰岛自身抗体在预测和诊断T1DM中起重要作用。联合检测GADA、IAA、IA-2A和ZnT8A四种胰岛自身抗体可以预测85％或更多的T1DM患者或T1DM高危人群。然而，高达15％的临床诊断T1DM患者目前已知的所有胰岛自身抗体均为阴性。因此，发掘新的胰岛自身抗体或建立更精确的检测方法是增加自身抗体阳性的T1DM患者的主要途径。针对现有技术的不足，提供一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提出了一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒，包括：用于检测泛素结合酶抗体的溶液；所述溶液包含用于标记泛素结合酶抗原蛋白的活性酯、泛素结合酶抗原蛋白和非放射性溶液。

进一步地，所述活性酯包括硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯。

进一步地，所述试剂盒还包括96孔平板、链霉亲和素石墨烯平板、PBS溶液、BSA溶液、PBST溶液和Block-A溶液。

进一步地，所述PBS溶液为1×PBS溶液。

进一步地，所述BSA溶液的浓度为5％。

进一步地，Block-A溶液的浓度为3％。

进一步地，所述链霉亲和素石墨烯平板为链霉素标记的MSD96孔板。

本发明还提供一种检测泛素结合酶抗体的制剂在用于检测存在T1DM的受试者的方法中使用的试剂中的应用，所述方法包括所述试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

使用硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯分别标记重组的泛素结合酶的抗原蛋白；

将标记后的泛素结合酶的抗原蛋白加入5％BSA的溶液进行稀释；

将96孔平板的每孔依次加入16μl的1×PBS溶液、4μl待测血清和稀释后的溶液，并将96孔平板中的混合溶液搅拌均匀；

将96孔平板放置在振荡器中低速振荡1h，振荡结束后将96孔平板在4℃的环境中储存6-12小时；

将装有150μl/孔的3％Block-A溶液的MSD96孔板在4℃的环境中储存6-12小时；将储存后的MSD96孔板使用150μl的PBST缓冲液洗涤3次；

将96孔平板中的混合溶液转移至MSD96孔板中，将装有混合溶液的MSD96孔板避光放置在在振荡器中低速振荡1h；

将振荡结束后的MSD96孔板使用150μl的PBST缓冲液洗涤3次，洗涤结束后将MSD96孔板加入150μl/孔的Readingbuffer溶液于MSD计数仪上进行计数；

根据MSD计数仪的输出结果计算泛素结合酶抗体的抗体指数。

本发明的有益效果：