[发明专利]一种层析介质及其制备方法

说明书

本发明公开了一种层析介质及其制备方法，该层析介质是一种用于病毒或类病毒颗粒纯化分离的层析介质，具有双层结构，包括具有离子疏水作用双功能配体的内层A和可排阻病毒或类病毒颗类多孔隙结构的外层B组成；该层析介质的制备方法包括以下步骤：利用多孔聚合物微球基质进行烯丙基活化处理；将烯丙基活化基质进行部分溴化处理；将部分溴化的基质进行碱处理；将碱处理的基质进行完全溴化处理；将完全溴化的基质进行具有离子疏水作用双功能配体偶联。有益效果：通过对介质内层结构中核心微球上配基的重新设计，得到一种双层结构层析介质，具有离子和疏水作用复合模式，极大的提高了生物大分子的中间纯化和精细纯化效果。

技术领域

本发明涉及层析介质技术领域，具体来说，涉及一种层析介质及其制备方法。

背景技术

目前已提出的层析法基于与目标相互作用的不同模式，如离子交换层析以及疏水性相互作用层析。其中，离子交换基于带电靶化合物与带相反电荷的层析基质之间的可逆相互作用。洗脱最常通过增加盐浓度进行，但改变pH同样是可能的。离子交换剂分为阳离子交换剂，其中用带负电荷的层析基质吸附带正电荷的靶化合物；和阴离子交换剂，其中用带正电荷的层析基质吸附带负电荷的靶化合物。用于分离生物分子的离子交换剂在低离子强度下能吸附大多数带电荷的生物分子，但是当离子强度提高至超过度一定水平时，这些介质失去吸附样品分子的能力。

疏水性相互作用层析法通常分为为HIC和RPC两种类型，HIC是指使用非常亲水性的基质的蛋白质的疏水性相互作用层析法，其中疏水性配体与蛋白质的固定化程度非常低，以避免己分离的蛋白质变性。为了吸附待分离的蛋白质，需要在水中使用高浓度的无机盐。RPC是指使用与疏水性非极性分子/配体(通常为包含4-18个碳原子的脂族碳链)官能化程度非常高的基质(通常基于二氧化硅)的层析法。含有18个碳链的RPC介质与蛋白质牢固结合，在结合过程中蛋白质也有不同程度的变性，在洗脱蛋白质过程中，使用的条件较为苛刻，也会使蛋白质发生变性。

因此，期望得到一种层析介质，具有离子和疏水作用复合模式。小于对应分子量的生物分子能够进入微球内部与配基基团结合，大于对应分子量的生物分子会被阻隔在微球外流穿通过层析柱。从而提高大分子和小分子之间的分辨率，使得分离纯化效果大大提高。

发明内容

针对相关技术中的问题，本发明提出一种层析介质及其制备方法，以克服现有相关技术所存在的上述技术问题。

为此，本发明采用的具体技术方案如下：

根据本发明的一个方面，提供了一种层析介质，该层析介质是一种用于病毒或类病毒颗粒纯化分离的层析介质，该层析介质具有双层结构，包括具有离子疏水作用双功能配体的内层A和可排阻病毒或类病毒颗粒多孔隙结构的外层B组成；

其中，所述层析介质具有以下通式：

其中，Q是多孔聚合物微球基质；S是-S-，-O-或-NH-基团；R是C1-C12直链烷基、C4-C8环烷基或不饱和芳香烃基团；n是1-4；X₁、X₂、X₃是相同或者不同C1C4烷基。

进一步的，所述多孔聚合物微球基质是一种多羟基聚合物微球，其材料为琼脂糖、葡聚糖、纤维素、淀粉、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酰胺、聚羟基烷基乙烯基醚、聚羟基烷基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯中的任意一种。

进一步的，所述多孔隙结构的外层B可排阻病毒或类病毒颗粒，且截留分子量大小为50-1000KDa。

进一步的，所述层析介质微球粒径是50-120μm。

进一步的，所述层析介质中双功能配体的密度为40-120μmol/mL介质。

根据本发明的另一个方面，提供了一种层析介质的制备方法，该制备方法包括以下步骤：