[发明专利]一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法

权利要求书

1.一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)原料检测筛选；(2)收集胎盘血和冲洗水；(3)对收集的胎盘血和冲洗水进行病原微生物灭活处理；(4)经病原微生物灭活处理后的液体进行冻融处理；(5)冻融处理后物料进行酶解；(6)酶解液离心分离、过滤、除菌获得小分子多肽无菌溶液；其中，

所述步骤(5)冻融处理后物料进行酶解的具体操作方法为：检测冻融物料的蛋白浓度，用纯水调节最终底物蛋白浓度为5-8％，调节冻融瓶中物料的pH值到6.0-8.0，按照底物蛋白含量加入碱性蛋白酶为2400-3000U/g，放入恒温摇床中，温度设置成50-55℃，酶解3-5h，得到酶解液。

2.根据权利要求1所述的一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤(1)原料检测筛选：收集健康产妇足月分娩的胎盘，经乙肝、丙肝、梅毒和艾滋检测合格后作为原料。

3.根据权利要求1所述的一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤(2)收集胎盘血和冲洗水：将合格的胎盘放入无菌托盘中，清除胎盘表面血污；用无菌的剪刀将胎盘剪成3-5厘米的组织块，并用2-3升注射用水进行组织表面和内部冲洗3-5次，挤压收集胎盘血和冲洗水后，弃除胎盘组织。

4.根据权利要求1所述的一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤(3)对收集的胎盘血和冲洗水进行病原微生物灭活处理：将收集的胎盘血和冲洗水装入无菌容器充分混匀后，向混匀后的液体中通15-20mg/L臭氧10-20分钟，进行病原微生物灭活处理。

5.根据权利要求1所述的一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤(4)经病原微生物灭活处理后的液体进行冻融处理：经病原微生物灭活处理后的液体进行2-4次冻融，冷冻温度在零下40℃，融化温度控制在10-25℃，控制每次融化时间不超过12小时。

6.根据权利要求1所述的一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤(6)酶解液离心分离、过滤、除菌获得小分子多肽无菌溶液：酶解液以4000-6000rpm离心20-50分钟后取上清液；然后用0.45um的滤膜过滤掉上清液中的细胞碎片，再用截留分子量为3-5KD的超滤膜过滤收集小分子多肽超滤液，最后用0.22um的滤膜过滤小分子多肽超滤液，进行除菌，得到小分子多肽无菌溶液；得到的小分子多肽无菌溶液需要在零下40℃～零下80℃冷冻保存。

7.根据权利要求1-6任一所述的一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，将得到的小分子多肽超滤液制备成冻干粉，具体方法为：在每100ml所述小分子多肽超滤液中加入6g的冻干保护剂，用0.22um的滤膜过滤除菌，分装至1ml/支，按照冻干程序进行冻干。

8.根据权利要求7所述的一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述冻干程序具体为：首先在零下50℃预冻2-3.5h，然后在冻干压力为20-60Pa，冻干温度为零下25℃-零下30℃的冻干条件下冻干24-36h，保持真空在30℃的冻干条件下10小时使产品含水量小于2％，即获得小分子多肽冻干粉。

9.根据权利要求8所述的一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述冻干保护剂为4份甘露醇与2份海藻糖的组合。