[发明专利]一种特异性预防真菌感染的寡糖疫苗及其制备方法

说明书

本发明属于生物技术领域，提供了一种特异性预防真菌感染的寡糖疫苗及其制备方法，该疫苗是由巯基化蛋白与寡糖偶联而成，巯基化蛋白是将巯基(‑SH)引入含有伯氨基(‑NH₂)的载体蛋白上，然后通过桥联剂的联结作用，与寡糖偶联，形成寡糖疫苗。所述的载体蛋白为非人源蛋白，寡糖为壳寡糖混合物和/或几丁质寡糖混合物。本发明提供的疫苗免疫原性强，能够激活Th17细胞免疫，可以识别并保护真菌所致的感染。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种特异性预防真菌感染的寡糖疫苗及其制备方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

真菌是自然界中广泛存在的微生物，也是人类皮肤、黏膜表面定居的常见菌，然而，当免疫系统受损或宿主屏障遭到破坏时，真菌可以侵入人体，导致致死性感染。据不完全统计，全球150万种真菌中有400多种能够导致人类严重的感染，大多数系统性真菌病是由念珠菌(Candida)、隐球菌(Cryptococcus)、曲霉菌(Aspergillus)引起的，相比于其它微生物的感染，临床上对于系统性真菌感染的认识不深、诊断方法有限，许多病人得不到及时的治疗。

近年来，尽管抗真菌药物越来越多，但因为抗真菌药物的抗菌谱有限、毒副作用和真菌的耐药性等问题，抗真菌药物的疗效是有限的。研究表明，与传统的抗真菌药物相比，真菌疫苗的开发显示了良好的应用前景。以β-葡聚糖、合成甘露糖与载体蛋白偶联后的糖蛋白化合物作为疫苗，起到了预防侵袭性真菌感染效果，但由于受试抗原需要通过复杂的化学合成工艺，限制了可用于筛选有效糖抗原的品种数量，目前在研疫苗的保护作用仍有待提高。另有研究将巯基化壳寡糖与异型双功能连接剂连接形成佐剂，再与减毒疫苗、蛋白质疫苗等偶联，此壳寡糖佐剂能够增强免疫应答，但由于壳寡糖上含有多个氨基，被巯基化后，一个多位点巯基化的壳寡糖与多个疫苗偶联，相当于壳寡糖的多个氨基抗原决定簇遭到修饰，不再是真菌细胞壁成分的完整机构，其制备的疫苗不能激发出有效识别真菌的免疫应答。

几丁质是广泛存在于真菌细胞壁的成分，壳寡糖是几丁质脱乙酰基后酶解得小分子寡糖，几丁质寡糖是几丁质经过酶解后得到的小分子寡糖，均具有与几丁质相似的单糖组成，可作为广谱抗真菌的靶点，具有一定的免疫原性。而该领域的广谱真菌疫苗还没有报道，其被免疫系统识别等机制仍不清楚。因此，基于真菌细胞结构的抗真菌疫苗的研究具有非常迫切的现实意义。

发明内容

为了克服上述问题，本发明的目的是提供一种特异性预防真菌感染的疫苗，用于预防和治疗免疫抑制患者真菌引起的感染。

为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一个方面，提供了一种特异性预防真菌感染的寡糖疫苗及其制备方法，包括：

对含有伯氨基的载体蛋白进行巯基化修饰，得到巯基化蛋白；

将所述巯基化蛋白与壳寡糖混合物和/或几丁质寡糖混合物偶联，形成寡糖疫苗。

研究发现：将巯基化修饰的蛋白与寡糖偶联，形成的寡糖疫苗偶联位置明确，特异性强；同时，采用的寡糖是不同聚合度的壳寡糖混合物和/或几丁质寡糖混合物，更容易引起机体细胞的免疫应答；因此，最终获得的寡糖疫苗可以更好地识别并预防真菌(如白色念珠菌、曲霉菌、新型隐球菌等)所致的感染。

本发明的第二个方面，提供了任一上述的方法制备的特异性预防真菌感染的寡糖疫苗。

本发明的第三个方面，提供了上述的特异性预防真菌感染的寡糖疫苗在制备治疗或预防系统性真菌感染的药物、或激活Th17细胞免疫应答的药物中的应用。

本发明的有益效果在于：