[发明专利]基于DNA树枝结构@Zr-MOF检测HBV-DNA的SPRi传感器的制备与应用

权利要求书

1.一种检测HBV-DNA的SPRi传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（a）制备DNA树枝结构：将三条5'端修饰了磷酸基团且碱基序列彼此互补的DNA链S1、S2、S3混合孵育，得到DNA树枝结构；

（b）制备HBV-DNA与Linker复合物：将HBV-DNA与Linker DNA混合，用作启动DNA树枝结构的自组装反应体系；

（c）将固定有捕获探针的SPRi芯片组装在SPRi平台上，先将步骤（b）中HBV-DNA与Linker复合物注入SPRi平台中，所述复合物与捕获探针结合，HBV-DNA与捕获探针杂交；然后将步骤（a）所得DNA树枝结构注入SPRi平台中，与被捕获的HBV-DNA杂交，并引起第一次SPR信号放大；最后注入Zr-MOF，Zr-MOF通过锆氧键与树枝结构交联，引起第二次SPR信号的大幅度增长，通过检测SPR信号，实现对HBV-DNA的检测；

所述S1的核苷酸序列为：

5'-CCTTAGCATTCGGACTATGGCATGAGCGTGATAGGGGT-3'（SEQ ID NO.1）；

所述S2的核苷酸序列为：

5'- CTCATGCCATAGTCCATTAGCTTGCTCGTGATAGGGGT-3'（SEQ ID NO.2）；

所述S3的核苷酸序列为：

5'-AGCAAGCTAATGGTGAGCACGGCAGGCGTGATAGGGGT-3'（SEQ ID NO.3）；

所述Linker DNA的核苷酸序列为：

5'-CCTGCCGTGCTCACCGAATGCTAAGGTACCGTCCCCTTC-3'（SEQ ID NO.4）；

所述HBV-DNA的核苷酸序列为：

5'-ACG GCA GAT GAA GAA GGG GAC GGT A-3'（SEQ ID NO.5）；

所述捕获探针的核苷酸序列为：

5'-TTC ATC TGC CGT TTT-3'（SEQ ID NO.6）。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（a）中，S1、S2、S3的摩尔比为1:1:1；S1、S2、S3通过DNA自组装形成树枝结构；孵育温度为26℃，孵育时间为30min，在PBS缓冲液中进行孵育。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（b）中，Linker DNA与HBV-DNA的摩尔比为1:1；孵育温度为26℃，孵育时间为30 min，孵育在PBS缓冲液中进行。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（c）中，所述Zr-MOF的制备方法为：将1,4-苯二甲酸、氧氯化锆八水合物分别用DMF溶解，然后将两种溶液混合在一起，再加入乙酸，然后于120℃孵育12小时，然后离心、洗涤、干燥得Zr-MOF纳米颗粒粉末。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：1,4-苯二甲酸、氧氯化锆八水合物的摩尔比100: 1。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（c）中，所述SPRi芯片为金阵列芯片；

所述SPRi芯片上捕获探针的固定方式为：将巯基标记的捕获探针滴加在经过金膜表面处理的芯片表面，置于4℃孵育过夜；然后用6-巯基乙醇封闭非特异性吸附位点。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（c）中，所述SPRi平台中还需要加入PBS缓冲液。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法制备得到的SPRi传感器。

9.一种非疾病诊断或治疗目的的用于检测HBV-DNA的SPRi传感方法，其特征在于：采用权利要求8所述的SPRi传感器。