[发明专利]一种鸭腺病毒3型菌株、鸭腺病毒卵黄抗体及其制备方法和应用有效
| 申请号: | 202110468521.X | 申请日: | 2021-04-28 |
| 公开(公告)号: | CN113278595B | 公开(公告)日: | 2023-05-09 |
| 发明(设计)人: | 李来旭;李睿;刘鑫莹;何鸿章;张强;周宇;明月月;李阁;张晏;胡芸 | 申请(专利权)人: | 重庆永健生物技术有限责任公司 |
| 主分类号: | C12N7/00 | 分类号: | C12N7/00;C07K16/08;A61K39/395;A61P31/20 |
| 代理公司: | 北京正华智诚专利代理事务所(普通合伙) 11870 | 代理人: | 李林合 |
| 地址: | 402473 重庆市*** | 国省代码: | 重庆;50 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 病毒 菌株 卵黄 抗体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种鸭腺病毒(Duck adenovirus)3型菌株,其特征在于,该鸭腺病毒3型菌株为鸭腺病毒3型YJ株,于2020年11月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,其保藏编号为CGMCC No.21093。
2.一种鸭腺病毒卵黄抗体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)对权利要求1所述的鸭腺病毒3型YJ株菌株进行灭活,然后对产蛋鸡进行免疫;
(2)经步骤(1)免疫的产蛋鸡鸡蛋鸭腺病毒卵黄中和抗体效价≥1:512时,收集鸡蛋,并保存于湿度为30~60%,温度为10~15℃的避光环境中;
(3)对收集的鸡蛋进行消毒并提取其中的卵黄,将其搅拌至呈膏状,再加入与卵黄等体积的注射用水后搅拌均匀;
(4)加入7~10倍原卵黄体积,pH值为5~6的酸化水,搅拌均匀后降温至2~4℃后,再静置12~15小时;
(5)吸取上清液,加入终浓度为1.0%的辛酸,搅拌均匀,于室温作用4~6小时后,收集80~90%下层液,然后过滤并收集滤液;
(6)将步骤(5)剩余物搅拌均匀,用连续管式离心机离心,收集离心液,合并滤液和离心液;
(7)调节步骤(6)所得产物pH值为5.5~7.5,过滤除菌后浓缩灭活即可。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述免疫过程为:
S1.基础免疫:鸡皮下注射免疫抗原1.0mL/只;
S2.加强免疫:基础免疫后14日,鸡皮下注射免疫抗原2.0mL/只;
S3.强化免疫:加强免疫后21日,鸡皮下注射免疫抗原2.0mL/只;
S4.维持免疫:当高免鸡蛋的鸭腺病毒3型YJ株菌株卵黄中和抗体效价临界1:512时,维持接种1次,鸡皮下注射免疫抗原2.0mL/只。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述消毒的过程为:
将鸡蛋置于40~50℃,0.1~0.5%的苯扎溴氨水溶液中浸泡15~20min,然后再于90~95℃水中浸泡2~5s。
5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤(7)中所述灭活的过程为:加入终浓度为0.05%的甲醛溶液,甲醛溶液中HCHO含量为37.0~40.0%,搅拌均匀,室温条件20~25℃下灭活24小时。
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