[发明专利]一种鉴别猪伪狂犬病毒基因缺失疫苗株和野毒株的荧光定量PCR检测试剂盒

权利要求书

1.荧光定量PCR检测鉴别猪伪狂犬病毒gI/gE基因缺失疫苗株和野毒株的引物和探针，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示；所述探针的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述猪伪狂犬病毒gI/gE基因缺失疫苗株为HB98和HB2000。

3.一种荧光定量PCR检测鉴别猪伪狂犬病毒gI/gE基因缺失疫苗株和野毒株的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的引物和探针。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括阴性对照、阳性对照，所述阳性对照为经实验室检测是PRV阳性样品的核酸，所述阴性对照为经实验室检测是PRV阴性样品的核酸。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括，基于化学法修饰的热启动DNA聚合酶、dUTP/UNG防污染系统、抗PCR抑制物因子。

6.一种用于非疾病诊断目的鉴别猪伪狂犬病毒疫苗株与野毒株的方法，其特征在于，使用权利要求1所述的引物和探针或权利要求3-5任一项所述的试剂盒对待测样品进行qPCR扩增反应。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述待测样品为猪血清、粪便、精液、组织、细胞培养物等样品中的猪伪狂犬病病毒的DNA。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，qPCR反应体系为2×primer-one step-mix，10μl；F-primer，0.5μl；R-primer，0.5μl；Probe，1μl；Rnase-Free-H₂O，6μl；DNA，2μl；qPCR反应程序为：95℃，2min；95℃，10s；60℃，35s；40个循环。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，qPCR扩增反应的结果判定标准为：

(1)样本Ct值≤35，判断样本为阳性；

(2)35＜样本Ct值≤38，若扩增曲线对数扩增曲线，判断为可疑阳性样本，否则判断样本为阴性；

对可疑阳性样本进行复检，若复检样本Ct值≤35，判断可疑阳性样本为阳性，否则判断样本为阴性；

(3)样本无Ct值或Ct值＞38，判断样本为阴性。

10.权利要求1-2任一项所述引物和探针，或权利要求3-5任一项所述的试剂盒，或权利要求6-9任一项所述的方法在猪伪狂犬病毒流行病学调查中的应用。