[发明专利]一种神经干细胞外泌体鼻腔喷剂及其制备方法

权利要求书

1.一种神经干细胞外泌体鼻腔喷剂，其特征在于，包括缓冲溶液和悬浮于缓冲溶液中的如下组分：

（1～100）×10⁸个/mL的神经干细胞外泌体；

占缓冲溶液质量分数为1.6～10%的渗透压调节剂；

占缓冲溶液质量分数为10～20%的甘油；

占缓冲溶液质量分数为0.05～0.1%的羊胎盘多肽；

占缓冲溶液质量分数的0.1～0.8%的枸橼酸钠；占缓冲溶液质量分数0.6～1.5%的壳聚寡糖；

所述渗透压调节剂为甘露醇、蔗糖、山梨醇中的一种，或甘露醇、蔗糖、山梨醇中任意数种的复配体系；

所述缓冲溶液的浓度为1～100mM，缓冲溶液选用磷酸缓冲溶液；所述缓冲溶液为的pH值为6.5～7.8，

所述神经干细胞外泌体鼻腔喷剂的制备方法，包括如下步骤：

S1、对神经干细胞进行培养、扩增，并分离，得到外泌体，采用如下方法：

（1）选取 4 周龄 SD 大鼠，用骨髓腔冲洗法提取股骨，分离得到骨髓间充质干细胞，在培养瓶中进行贴壁培养，每 2 日更换一次培养基；洗去未贴壁的细胞；当培养瓶内贴壁面积大于 80%后，改用超低附着性培养瓶悬浮培养，继续培养三天；

（2）分离其中的悬浮细胞体，换用无血清 DMEM 培养基继续培养两天；

（3）收集上述接培养体系中的培养基上清液，用 0.22μm 的滤膜过滤后，在 4℃下 300×g 下离心 10min，保留上清液；

（4）对步骤（3）中离心得到的上清液，在 2000×g 下离心 100min，保留上清液；

（5）对步骤（4）中离心得到的上清液，在 10000×g 下离心 30min，保留上清液；

（6）对步骤（5）中离心得到的上清液，在 100000×g 下离心 70min，保留沉淀，得到外泌体；

S2、按照计算量，在不超过4℃的条件下向外泌体中加入事先添加好的渗透压调节剂的缓冲溶液中，并吹打均匀。

2.根据权利要求1所述的一种神经干细胞外泌体鼻腔喷雾剂，其特征在于，该鼻腔喷雾剂保存4℃以下的环境。

3.根据权利要求1所述的一种神经干细胞外泌体鼻腔喷剂，其特征在于，在步骤S2中，缓冲溶液中还预先添加甘油，吹打均匀后，继续向体系中加入羊胎盘多肽和壳聚寡糖，并保存于4℃以下环境下。