[发明专利]适用于聚球藻UTEX 2973的Neu5Ac-NanR诱导系统及构建方法与用途

说明书

本发明公开了适用于聚球藻UTEX 2973的Neu5Ac‑NanR诱导系统及构建方法与用途,诱导系统构建：构建载体pSI‑SPE‑PJ23119_H10‑RBS：BBa_B0034‑受调控基因‑T₀‑P_trc‑nanR‑T_rbcl；转入聚球藻，筛选阳性克隆，获得的工程菌株其NSI位点被整合上了SPE‑PJ23119_H10‑RBS：Baa_B0034‑受调控基因‑T₀‑P_trc‑nanR‑T_rbcl序列；该序列为Neu5Ac‑NanR诱导系统；本发明的诱导系统具有渗漏低，诱导倍数高，响应迅速的优点，可用于控制sRNA的转录，与茶碱诱导型启动子联合工作，丰富了蓝细菌中可用的诱导表达工具。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及适用于聚球藻UTEX 2973的Neu5Ac-NanR诱导系统及构建方法与用途。

背景技术

在全球资源短缺和环境污染日益严重的背景下，光合生物制造为实现可持续发展提供了一条极具前景的途径。蓝细菌是能一类能够进行光合作用的原核微生物。合成生物学的进步已经实现了在蓝细菌中利用光能和二氧化碳合成几十种化合物。蓝细菌有希望成为可持续生产药物、有价值的化合物和生物燃料的“光合微生物细胞工厂”。目前，主要以集胞藻PCC 6803、聚球藻PCC 7942和聚球藻PCC 7002作为底盘细胞，这几种光合底盘细胞较慢的生长速度，对于高光和高温的低耐受性限制了其作为“光合微生物细胞工厂”的应用。近年来发现的聚球藻UTEX 2973(Synechococcus elongatus UTEX 2973)是一种在聚球藻UTEX 625中最新分离出来的一种聚球藻，具有耐高光、耐高温、快速生长的特点，是极具潜力的底盘菌株。

工程构建过程中，来自外源基因或目标产物的潜在代谢负担或毒性会威胁宿主细胞的生长和活力。因此，合适的可控开关感应并响应特定的诱导剂来分离菌株的生长和外源基因的表达，对于构建具有代谢负担或毒性的人工通路具有重要价值。一个良好的基因开关应满足低泄漏和广泛诱导变化的要求，实现对目标基因的严密控制和高水平表达。而对于聚球藻UTEX 2973来说，尽管内生或外生诱导系统已经开发出来，但许多诱导系统的使用场景受限，与常用的异养微生物底盘菌株相比，蓝细菌中可用的诱导系统仍然较少，远远不能满足合成生物学的需求。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供适用于聚球藻UTEX 2973的Neu5Ac-NanR诱导系统。

本发明的第二个目的是提供适用于聚球藻UTEX 2973的Neu5Ac-NanR诱导系统的构建方法。

本发明的第三个目的是提供适用于聚球藻UTEX 2973的Neu5Ac-NanR诱导系统的用途。

本发明的第四个目的是提供第二种适用于聚球藻UTEX 2973的Neu5Ac-NanR诱导系统。

本发明的第五个目的是提供第二种适用于聚球藻UTEX 2973的Neu5Ac-NanR诱导系统的构建方法。

本发明的第六个目的是提供第二种适用于聚球藻UTEX 2973的Neu5Ac-NanR诱导系统的用途。

本发明的技术方案概述如下：

第一种适用于聚球藻UTEX 2973的Neu5Ac-NanR诱导系统的构建方法，包括如下步骤：