[发明专利]用于检测牛传染性鼻气管炎病毒的中和抗体的阻断ELISA试剂盒及其应用

权利要求书

1.抗牛传染性鼻气管炎病毒的具有中和活性的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.21015的杂交瘤细胞所分泌。

2.分泌权利要求1所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No. 21015。

3.用于检测牛传染性鼻气管炎病毒的中和抗体的试剂盒，其包含权利要求1所述的抗牛传染性鼻气管炎病毒的具有中和活性的单克隆抗体。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含牛传染性鼻气管炎病毒的截短的gD蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含酶标板；所述截短的gD蛋白被预先包被在酶标板上或临用前包被在酶标板上。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述截短的gD蛋白在酶标板上的包被量为0.25～0.5μg/孔。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述截短的gD蛋白的包被液为0.1M，pH8.5的Tris-HCL缓冲液。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述单克隆抗体的工作浓度为0.54～2.15μg/mL。

9.根据权利要求3-8任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含封闭液、洗涤液、显色液和终止液；所述封闭液为5%鸡血清。

10.一种非诊断目的的检测牛传染性鼻气管炎病毒的中和抗体的阻断ELISA方法，其特征在于：使用权利要求4-9任一所述的试剂盒进行检测，包括如下步骤：

（1）用0.1M pH8.5 Tris-HCL缓冲液溶解所述截短的gD蛋白，然后加入酶标板中，蛋白包被量为0.25～0.5μg/孔，孵育；洗酶标板；

（2）加入5%鸡血清，封闭；洗酶标板；

（3）将待检血清样品稀释2倍后，加入酶标板中，孵育；洗酶标板；

（4）使所述单克隆抗体带上显色标记，然后配制成0.54～2.15μg/mL的抗体溶液，加入酶标板中，孵育；洗酶标板；

（5）加入显色液显色；

（6）加入终止液，轻轻混匀后在酶标仪中读取450nm处的吸光值；

（7）样品孔的OD450与阴性对照孔的OD450的比值为S/N值；若S/N值≥0.885，则样品中不含有牛传染性鼻气管炎病毒的抗体；若S/N值﹤0.885，则样品中含有牛传染性鼻气管炎病毒的抗体。