[发明专利]一种快速鉴定大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼及其亲本的引物及方法

说明书

一种快速鉴定大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼及其亲本的引物及方法，属于分子标记技术领域。本申请一方面提供了一种快速鉴定大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼及其亲本的引物，另一方面提供了一种利用引物进行快速鉴定大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼及其亲本的方法。本发明利用5S rDNA基因开发特异性分子标记，并且只需对实验样本基因组DNA进行PCR扩增就可成功对杂交鱼（大黄鱼♀×小黄鱼♂）、小黄鱼及大黄鱼进行鉴定。

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，具体涉及一种快速鉴定大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼及其亲本的引物及方法。

背景技术

小黄鱼（Larimichthys polyactis）和大黄鱼（Larimichthys crocea），均属于鲈形目（Perciformes），石首鱼科（Sciaenidae），黄鱼属（Larimichthys），是我国近海两种重要的经济鱼类，与带鱼、曼氏无针乌贼并称为四大海产。同时，二者在形态、生活习性、生长及抗逆性等方面又有着较大差异。大黄鱼性成熟期晚，个体大，抗应激性较强，但不耐低温；小黄鱼相对耐低温，但其体型小，抗应激性差。杂交育种作为重要的技术手段，在种质改良方面发挥着极其重要的作用。因小黄鱼与大黄鱼的繁殖温度不同，在自然海区尚未发现杂交现象。为进行遗传改良，本申请人利用大黄鱼（♀）和小黄鱼（♂）进行人工杂交，获得了正常生长的杂交子代（大黄鱼♀×小黄鱼♂）。

杂交子代（大黄鱼♀×小黄鱼♂）及其亲本的亲缘关系较近，外观形态相似，尤其在苗种阶段较易混淆。现有的杂交子代鉴定方法主要是根据形态学进行区分，但其准确性易受主观因素的影响，在养殖生产过程中容易造成种质的混杂。

公开号为CN106701969A的发明专利公开了一种快速区分小黄鱼和大黄鱼及判定小黄鱼和大黄鱼杂交种的引物及方法，但是其鉴定的小黄鱼和大黄鱼杂交种为小黄鱼♀×大黄鱼♂，其并不能鉴定大黄鱼♀×小黄鱼♂的杂交子代。

因此，建立一种快速鉴定杂交子代（大黄鱼♀×小黄鱼♂）及其亲本（小黄鱼、大黄鱼）的特异性分子标记及方法是非常必要的。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种快速鉴定大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼及其亲本的引物及方法的技术方案。

本发明具体采用以下技术方案实现：

本发明一方面提供了一种快速鉴定大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼及其亲本的引物，该杂交鱼母本为大黄鱼，父本为小黄鱼，该引物包括引物5S-F和引物5S-R，所述引物5S-F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述引物5S-R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明一方面提供了上述引物在快速鉴定大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼及其亲本中的应用，该杂交鱼母本为大黄鱼，父本为小黄鱼。

本发明另一方面提供了一种快速鉴定大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼及其亲本的方法，该杂交鱼母本为大黄鱼，父本为小黄鱼，其包括以下步骤：

1）提取大黄鱼、小黄鱼以及大黄鱼与小黄鱼的杂交鱼的DNA；

2）分别以大黄鱼、小黄鱼和杂交鱼的DNA样品为模板，并使用引物5S-F和5S-R进行PCR扩增；

3）PCR反应结束后，用1.2%的琼脂糖凝胶检测扩增产物；