[发明专利]一种基于pH响应的DNA纳米机器建立可编程细胞间通讯的方法

权利要求书

1.一种基于pH响应的DNA纳米机器建立可编程细胞间通讯的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：提供一种含有60％TAT的三链DNA结构，所述三链DNA结构的序列为：(5’-3’)AAGGAAGAAGTTT(BHQ-1)ACTTCTTCCTTCTTTGTTCCTTCTTC-Alexa Flour488，所述三链DNA结构的5’端修饰由数个碱基形成的ssDNA-1，3’端修饰了pH不敏感的基团Alexa Flour488，茎环结构中插有淬灭基团BHQ1，所述ssDNA-1的碱基数量为20～30个；

S2：提供一种细胞，并在细胞膜上插入胆固醇修饰的与所述ssDNA-1互补配对的ssDNA-2，将该细胞与来自步骤S1的三链DNA结构混合孵育后，通过测量细胞的荧光强度，分析细胞在pH6.5-7.5之间的不同pH环境下的荧光强度变化，确定所述三链DNA结构成功锚定在细胞膜上，并且具有可开关的特性；

S3：将锚定了所述三链DNA结构的细胞与另一组修饰了ssDNA-2的细胞进行共孵育，通过流式细胞荧光分选技术确定在pH6.5-7.5之间的不同pH环境下细胞的组装效率；

S4：将所述三链DNA结构拆分为一个茎环结构和一条ssDNA-1，分别利用胆固醇修饰固定在两组细胞的细胞膜上，并且在pH6.5-7.5之间的不同pH环境下将两组细胞进行共孵育，通过流式细胞荧光分选技术确定细胞组装效率；

S5：对步骤S4的其中一组细胞使用CellTracke DeepRed进行胞质染色，经三链DNA结构介导的细胞组装后，通过共聚焦荧光显微镜分析邻近细胞的胞内荧光强度即可确定细胞间的分子传递。

2.根据权利要求1所述的基于pH响应的DNA纳米机器建立可编程细胞间通讯的方法，其特征在于，步骤S2包括：通过检测AL488的荧光强度在pH6.5-7.5之间的变化来测试所述三链DNA结构在细胞膜上开关的可逆性。

3.根据权利要求1所述的基于pH响应的DNA纳米机器建立可编程细胞间通讯的方法，其特征在于，步骤S3和步骤S4均包括：使用流式细胞仪对细胞进行分选，统计488纳米和633纳米通道双阳性的细胞群体数量并成像。

4.根据权利要求1所述的基于pH响应的DNA纳米机器建立可编程细胞间通讯的方法，其特征在于，步骤S5包括：荧光分析时所采用的激发光波长为633纳米，记录650-690纳米处的荧光发射强度。

5.根据权利要求1所述的基于pH响应的DNA纳米机器建立可编程细胞间通讯的方法，其特征在于，所述三链DNA结构5’端延长的ssDNA-1的碱基序列为ACCACCACCACCACCACCAA。