[发明专利]基因spt5在检测美网柄牛肝菌源性成分中的应用

说明书

本发明公开一种基因spt5在检测美网柄牛肝菌源性成分中的应用及其试剂盒，本发明筛选出一个美网柄牛肝菌通用基因spt5，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，以该基因为靶序列建立了检测该内标基因的定性PCR和定量PCR方法，本发明可快速、灵敏地检测食品中的美网柄牛肝菌源性成分，灵敏度高，特异性强，操作简单、成本低廉，反应结果易于观察，非常适用于现场实时检测，在美网柄牛肝菌源性成分掺假方面应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及生物物种鉴定和PCR检测技术领域，具体的说涉及一种基因spt5在检测美网柄牛肝菌源性成分中的应用及其试剂盒。

背景技术

美网柄牛肝菌（Boletus reticulatus）是一种可以食用的野生菌，在云南有丰富的资源。美网柄牛肝菌的肉质肥厚细腻，滋味鲜美，营养价值非常丰富。由于美网柄牛肝菌含有丰富的营养物质，并且是食药兼用的具有很高价值的野生食用菌，所以也会随之产生一些掺假现象。随着科技进步，人们要求的增加，食品加工技术越发成熟，随之带来的是不良商贩造假现象的大量出现。消费者购买产品有权知道自己所购买的商品具体材料是什么，成分是什么。为了改善这种掺假的现状，维护消费者权益，建立高效、快速的野生食用菌检测技术就十分有必要。

鉴定菌种的方法有很多种，包括形态学方法、动物学方法、分子标记技术等。分子标记的技术克服了传统的生物学鉴定方法易受环境和生理状况的影响，而使得鉴定结果不准确的弊端。所以对于一些深加工产品，分子生物学法检测分析就非常准确、方便、迅速，并且随着近些年技术的快速发展，该方法已与传统的检测方法相辅相成甚至取而代之。然而这些技术需要前期设计多对引物，进行PCR扩增，或者后期对扩增产物进行测序，通过序列的比对，才能达到我们检测的目的。

内标准基因是指具有拷贝数恒定、物种专一性、不显示等位基因变化的保守DNA序列。在PCR的检测中，最基础的就是对内标准基因进行检测；并且在PCR检测时需要对PCR体系建立是否可靠，提取的基因组DNA样品是否适用于PCR反应进行检测分析。在开发一种物种的内标准基因，优先选择同源序列少、序列较完整的基因，以保证物种的特异性。所以当一个新的内标准基因被开发时，应该首先通过 BLASTN，在 GeneBank 中寻找物种特异性强、序列完整的基因。再通过 PCR 验证引物的物种特异性，最后选择特异性好，灵敏度高的引物作为内标准基因。成分来源的鉴别中，使用内标准基因检测就比较方便准确快捷。像野生菌这样的高价值食品，深受大家喜爱，但是中毒等现象层出不穷，并且许多的野生食用菌单凭形态特征无法判断其种类，所以通过内标准基因来鉴定就十分精准。

发明内容

本发明的目的是提供一种基因spt5在检测美网柄牛肝菌源性成分中的应用，以基因spt5作为内标准基因，该内标基因spt5在美网柄牛肝菌源性成分鉴定中的应用，基因spt5的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供一种用于检测美网柄牛肝菌源性成分的试剂盒，以基因spt5为靶基因建立的试剂盒，其包括扩增基因spt5的特异性引物，采用PCR方法检测内标准基因spt5的特异性引物，特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示，试剂盒还包括用于扩增的其他常规试剂。

本发明确定的用于检测野生菌食品中美网柄牛肝菌源性成分的基因spt5，设计了用于检测该基因的定性PCR和定量PCR的引物作为试剂盒，建立了检测美网柄牛肝菌源性成分的PCR方法，该方法费时少，特异性好，灵敏度高，操作简单，结果易于观察。

附图说明