[发明专利]高效分泌犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株C68及利用生物反应器对其进行生产的方法

权利要求书

1.一种高效分泌犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株C68，保藏编号为：CGMCCNo.21903。

2.一种利用生物反应器生产高效分泌犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株C68的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

步骤一、通过有限稀释法对犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株进行亚克隆；

步骤二、通过血凝抑制方法检测经亚克隆所得到的不同细胞株的效价，筛选出效价最高的细胞株C68；

步骤三、将细胞株C68在生物反应器中进行连续培养或批次培养。

3.根据权利要求2所述的利用生物反应器生产高效分泌犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株C68的方法，其特征在于所述步骤三中，连续培养条件为：温度为37℃，搅拌转速为70rpm，溶氧为40%，pH为6.85。

4.根据权利要求2所述的利用生物反应器生产高效分泌犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株C68的方法，其特征在于所述步骤三中，批次培养条件为：温度为37℃，搅拌转速为70rpm，溶氧为40%，pH为6.85。

5.根据权利要求2所述的利用生物反应器生产高效分泌犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株C68的方法，其特征在于所述步骤三中，连续培养和批次培养均包括细胞生长阶段和抗体分泌阶段两个阶段，具体培养要求如下：

连续培养：种细胞在反应器中培养24小时后，细胞密度为2.5*106个/ml时，开始进行流加培养，每24小时流进200ml流加培养基，每日从反应器内取样检测细胞密度、成活率并通过血凝抑制试验检测抗体效价，当效价达到1:2560时，开始收获细胞悬液，此时开启反应器的出液管道，将流速设置为每24小时收获2L，同时进行同流速补液；

批次培养：种细胞在反应器中培养24小时后，细胞密度为2.5*106个/ml时，开始添加流加培养基，每24小时流进200ml流加培养基，每日从反应器内取样检测细胞密度、成活率并通过血凝抑制试验检测抗体效价，当效价达到1:2560时，即可全部收获。