[发明专利]基于微滴数字PCR技术检测猪链球菌的引物和探针及试剂盒和方法

权利要求书

1.一种组合物，其特征在于，包括引物对和探针，所述引物对的核苷酸序列如SEQ IDNO:1～2所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述探针的5’端标记有荧光发射基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述荧光发射基团选自FAM、CY5、VIC、JOE和HEX；所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、TAMRA和MGB。

4.如权利要求1至3任一项所述的组合物在制备猪链球菌的检测试剂中的应用。

5.一种试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的组合物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括ddPCR预混液、无核酸酶水、阴性对照品和阳性对照品。

7.如权利要求5或6所述的试剂盒在猪链球菌检测中的应用。

8.一种基于微滴数字PCR技术检测猪链球菌的方法，其特征在于，包括使用如权利要求1至3任一项所述的组合物，或使用如权利要求5或6所述的试剂盒对待测样品进行检测。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

取待测样品的DNA、阳性对照品和阴性对照品分别与ddPCR反应液混合，形成ddPCR反应体系；其中，所述ddPCR反应液包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示的引物对，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的探针、ddPCR预混液和无核酸酶水；

对所述ddPCR反应体系进行PCR扩增；

PCR扩增结束后，通过微滴读取仪直接读出反应体系中样本拷贝数。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序为：92～98℃9～11min；91～97℃25～35s，55～61℃55～65s，38～42个循环；96～99℃9.5～10.5min。