[发明专利]用于核酸扩增的样品制备

权利要求书

1.一种流通池，所述流通池包含固定的扩增引物和以下的一种或更多种：福尔马林、石蜡、细胞组分、蛋白质、细胞外基质组分、胶原和组织碎片。

2.根据权利要求1所述的流通池，其中所述流通池包含至少0.001pg石蜡。

3.根据权利要求1所述的流通池，其中所述流通池包含至少0.01pg、0.1pg、1pg、10pg、100pg、1ng、10ng、100ng、1μg、10μg、100μg或至少1mg石蜡。

4.一种流通池，所述流通池包含固定的扩增引物和蛋白酶K。

5.根据权利要求4所述的流通池，其中所述流通池包含至少0.001pg蛋白酶K。

6.根据权利要求4所述的流通池，其中所述流通池包含至少0.01pg、0.1pg、1pg、10pg、100pg、1ng、10ng、100ng、1μg、10μg、100μg或至少1mg蛋白酶K。

7.一种制备用于文库扩增和随后测序的样品的方法，所述方法包括以下的步骤：

(a)提供含有核酸的细胞样品；

(b)用裂解试剂裂解所述细胞样品的细胞以从所述细胞样品的所述细胞内释放核酸，从而形成裂解物；和

(c)使所述裂解物中的所述核酸片段化；

其中在开始片段化步骤(c)之前，不从所述裂解物纯化核酸。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述细胞样品是血液样品，优选地全血样品。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述细胞样品是非血液样品，诸如组织样品、抽出物。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述组织样品是肿瘤或活体组织切片。

11.根据权利要求7-10中任一项所述的方法，其中所述裂解试剂是水。

12.根据权利要求7-11中任一项所述的方法，其中还向所述裂解物添加酶以便破坏DNA结构。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述酶是蛋白酶K。

14.一种制备用于测序的样品的方法，所述方法包括将FFPE样品放置到扩增反应缓冲液中，并且直接对所述FFPE样品进行靶向扩增。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述扩增反应缓冲液包含聚合酶、引物、dNTP和盐中的一种或更多种。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述靶向扩增包括在90摄氏度以上加热反应混合物。

17.一种在固体表面上进行聚簇反应的方法，其中所述聚簇反应在以下的一种或更多种的存在下进行：福尔马林、石蜡、细胞组分、蛋白质、细胞外基质组分、胶原和组织碎片。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述聚簇反应在至少0.001pg石蜡的存在下进行。

19.根据权利要求17所述的方法，其中所述聚簇反应在至少0.01pg、0.1pg、1pg、10pg、100pg、1ng、10ng、100ng、1μg、10μg、100μg或至少1mg石蜡的存在下进行。

20.一种在固体表面上进行聚簇反应的方法，其中所述聚簇反应在蛋白酶K的存在下进行。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述聚簇反应在至少0.001pg蛋白酶K的存在下进行。

22.根据权利要求20所述的方法，其中所述聚簇反应在至少0.01pg、0.1pg、1pg、10pg、100pg、1ng、10ng、100ng、1μg、10μg、100μg或至少1mg蛋白酶K的存在下进行。