[发明专利]一种鸡PTF1a基因重组蛋白、多克隆抗体制备方法

权利要求书

1.一种用于扩增鸡PTF1a基因的引物组，其特征在于：碱基序列如SEQ ID NO.1- SEQID NO.22所示。

2.一种鸡PTF1a基因重组蛋白，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.24。

3.一种鸡PTF1a基因多克隆抗体制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、设计引物进行PCR扩增，以PET-B2M为载体，以NotI CpoI酶切位点进行载体与鸡PTF1a基因的连接得到重组质粒，并转化至感受态细胞中，将转化后的感受态细胞进行培养，选取阳性克隆抗体进行测序；

步骤二、将测序正确的阳性克隆接种于LB中扩大培养，挑选含重组质粒的单菌落进行培养，超声破碎菌体，离心收集上清和沉淀，获得包涵体蛋白；

步骤三、将将包涵体蛋白溶解、亲和纯化，测定重组蛋白纯度；

步骤四、将重组蛋白进行三次动物免疫，末次免疫后10d采集动物血清抗原，对抗原进行效价检测、抗体纯化并对抗原进行WB检测。

4. 根据权利要求1所述的鸡PTF1a基因多克隆抗体制备方法，其特征在于：步骤一中所用载体为pet-b2m，酶切位点为NotI CpoI，感受态细胞为TOP10，质粒提取试剂盒为Axygen，Pfu DNA polymerase为Life technology，T4 DNA连接酶为Fermentas。

5.根据权利要求1所述的鸡PTF1a基因多克隆抗体制备方法，其特征在于：步骤一中PCR扩增条件为：95℃预变性5min，95℃变性15s，55℃退火30s，72℃延伸1min，25个循环。

6.根据权利要求1所述的鸡PTF1a基因多克隆抗体制备方法，其特征在于：所述抗体纯化是将获得的血清上样至预处理过的层析柱中，经洗杂、抗体洗脱、pH调节、样品浓缩、透析、层析柱洗涤进行纯化。

7.根据权利要求6所述的鸡PTF1a基因多克隆抗体制备方法，其特征在于：所述抗体洗脱使用0.1MPH3.0甘氨酸洗脱，收集洗脱物并用G250检测洗脱产物至不变蓝为止，反应60min。