[发明专利]基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法

说明书

本发明属于微流控免疫芯片快速检测应用领域，具体涉及一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理分析方法。人参皂苷Re前处理供试品溶液经甲醇溶液超声处理，过滤即得；再结合微流控人参皂苷Re免疫芯片进行荧光快速检测。本发明提供一种比药典更简单样品前处理提取方法，仅需甲醇超声15‑45min，前处理后的样品检测速度快，大大提高了检测效率。有机试剂用量仅需几毫升，对环境污染少，无需昂贵的耗材和精密仪器，检测成本大大减低。

技术领域

本发明涉及中药成分检测技术领域，具体涉及一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法。

背景技术

近些年来，随着中医药现代化和人们对健康意识的不断提升，中药材和中药饮片质量的有效性和安全性受到普遍关注。目前，针对中药材的质量和安全性评价应用最多的仍是基于仪器分析的技术手段，如高效液相色谱、气相色谱、质谱、色谱-质谱联用技术等。仪器分析具有灵敏度高、精密度高、重现性好、易于标准化等优点，但样品前处理繁琐、操作复杂、使用有机试剂耗材多、耗时长、检测成本高、无法满足简单快速低成本的检测要求。

免疫检测技术具有样品量小，操作简单，检测快速，检测成本低廉，高通量及易于现场化等优点。目前在中药领域应用较多有免疫检测有酶联免疫 ELISA法和胶体金检测法，但酶联免疫ELISA法免疫反应操作繁琐，需要多次孵育、耗时、专业性强等，胶体金检测稳定性、准确度差等。酶联免疫和胶体金这两者都不能满足现场快速化检测。微流控免疫芯片是集微流控技术与免疫反应于一体的生物芯片，该芯片具有高效、快速地完成各种微分析检测，并具有试剂用量少、成本低和环保、快速等优点。近几年，微流控免疫芯片在细胞分析、离子和小分子分析、免疫分析、基因分析和蛋白质分析鉴定等领域得到广泛应用，但目前在中药材有效成分快速检测领域应用较少。

人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎。人参性甘、微苦。归脾、肺、心、肾经。具有大补元气、复脉固脱，补脾益肺等功效，临床上用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少、肺虚喘咳，内热消渴等。主要化学成分包括皂苷类、多糖、挥发油、黄酮、有机酸、蛋白质、维生素以及无机元素等，其中皂苷类化合物为主要化学成分。人参皂苷Re是人参皂苷的重要组成部分，属于四环三萜类的衍生物，易溶于水、甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯，不溶于乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。目前，人参的含量主要采用2020版《中国药典》方法样品前处理方法，用HPLC检测人参皂苷Rg1、 Re和Rb1但该方法人参前处理供试品溶液制备复杂，需要三氯甲烷索式提取，挥干、加饱和正丁醇溶液过夜净置，然后超声提取，过滤、再挥干，再用甲醇复溶并定容，最后进液相检测。此过程相当复杂，操作过程人为误差较大。并需要大量的三氯甲烷、饱和正丁醇和甲醇等试剂，不仅对环境污染大，而且对操作人员身体健康不利。并需要一个固定的分析实验室及昂贵的高效液相设备，不适合现场即时的大批量样品的快速检测。

在研究微流控免疫芯片检测人参皂苷Re过程中，如采用2020版《中国药典》提供的样品前处理方法不仅制备过程复杂、试剂耗材用量大，且对环境污染大，因此有必要研究一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re前处理方法。

发明内容

鉴于此，本发明提供一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法，解决现有技术传统前处理方法过程复杂、对环境污染大等问题。

本发明提供的技术方案如下：

一种基于微流控免疫芯片快速检测人参皂苷Re的前处理方法，将人参粉末经醇溶液超声处理后，取滤液得处理后样品；所述醇溶液包括甲醇。

进一步地，按质量体积比g/ml计，所述人参粉末与醇的比例为1：(8-30)。

进一步地，所述醇溶液为甲醇，或甲醇的混合醇溶液，混合醇溶液中包含乙醇和/或正丁醇。

进一步地，所述超声条件为250W、50kHz，时间为15-45min。