[发明专利]科博肽中杂质的鉴定方法及科博肽纯度的检测方法

权利要求书

1.科博肽中杂质的鉴定方法及科博肽纯度的检测方法，其特征在于，基于CESI-MS法对科博肽中主要成分及杂质进行鉴定，并基于CE-UV法对科博肽含量或纯度进行检测；且CESI-MS法与CE-UV法的出峰顺序及峰型一致；

将科博肽样品溶于缓冲液中配制成样品溶液，进行CESI-MS检测，得到CESI-MS分析谱图中至少包含1、2、3、4号峰，其中2号峰为主成分峰，1、3和4号峰为杂质峰；各峰对应的分子量如下：

2号峰：6948.24Da；

1号峰：6850.33Da；

3号峰：6949.17Da；

4号峰：7007.36Da；

CESI-MS法中CE方法包括：熔融石英毛细管初次使用时，用甲醇在30psi-500psi压力下冲洗毛细管10-60分钟，然后依次用水、0.01-0.50M NaOH、0.01-0.50M HCl和水在100psi压力下各冲洗10分钟，最后用背景电解质在100psi压力下冲洗10分钟；在每针运行之间依次用0.01-0.5M NaOH、0.01-0.5M HCl和水在30-500psi压力下各冲洗4分钟，最后用背景电解质在30-500psi压力下冲洗1-10分钟；将样品溶解在缓冲液中，在1-5psi压力下进样10-600s；紧接着在1-50psi压力下进样1-250s的背景电解质；分离毛细管温度为20-60℃，样品保存温度为-20～25℃；分离电压为1-50kV，同时施加正向压力1-10.00psi；分离时间为1-90min；

MS方法包括：采用正离子、IDA模式采集数据，气帘气流速1-50L·h^-1，源温度20-250℃，去簇电压20-100V，碰撞电压1-50V，喷雾电压为1000-4500V；MS扫描范围为100～2000m/z，一级累计扫描时间为1-500ms；

科博肽含量或纯度的检测方法包括：

1)将科博肽标准品溶于缓冲液中配制成不同浓度的标准品溶液，进行CE-UV检测，根据溶液浓度与对应的紫外检测峰面积的关系绘制标准曲线；

2)将待测样品溶于缓冲液中配制成样品溶液，采用与1)相同的方法进行CE-UV检测，根据样品溶液的峰面积和标准曲线，得出待测样品中科博肽的含量；

CE-UV法中CE方法包括：熔融石英毛细管初次使用时，依次用0.01-0.5M NaOH、0.01-0.5M HCl和水在1-50psi压力下各冲洗1-10分钟，最后用背景电解质在1-50psi压力下冲洗1-10分钟，并在20-100kV电压下平衡1-20分钟；在每针运行之间依次用0.01-0.5M NaOH、0.01-0.5M HCl和水在100psi压力下各冲洗1-10分钟，最后用背景电解质在1-50psi压力下冲洗5分钟；

紫外检测波长范围为210-220nm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，科博肽的线性检测范围为10-1000ug/mL，检出限为2.50ug/mL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液为去离子水。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述背景电解质为1-50mM NH₄AcpH 4.0。