[发明专利]一种基于天然配体制备靶向HER2/EGFR CAR-T的方法及应用

说明书

本发明提供了基于天然配体制备靶向HER2/EGFR CAR‑T的方法及应用。具体地，本发明提供了一种基于脯氨酸肽酶(Prolidase PEPD)改造的嵌合抗原受体(CAR)，所述的CAR含有一胞外结合域，所述的胞外结合域能够同时靶向HER2和EGFR。本发明的CAR对HER2或者EGFR阳性的肿瘤细胞均具有细胞毒性，能显著抑制体内肿瘤的生长。并且，在非人灵长类猴子体内验证数据表明，本发明的CAR‑T毒性低。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫治疗领域，具体涉及一种基于天然配体制备靶向 HER2/EGFRCAR-T的方法及应用。

背景技术

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫疗法是近年来发展起来的一种新兴细胞 免疫疗法，自在血液肿瘤中取得巨大成功后，目前有大量的临床研究。不幸的 是，尽管CAR-T细胞可以在体外杀死实体瘤细胞并在临床前小鼠模型中成功抑 制肿瘤生长，但在临床试验中，它在实体瘤的治疗方面进展甚微。这可能归因 于几个原因，其中最重要的两个原因是癌细胞上抗原表达的微环境和异质性。 在临床前小鼠模型中观察到，肿瘤细胞的复杂且抑制性微环境可能会阻止 CAR-T细胞进入肿瘤块，抑制CAR-T细胞的毒性并使CAR-T细胞耗尽。癌细胞 上抗原表达的异质性使得难以通过单个特异性CAR-T根除所有肿瘤细胞，靶抗 原表达的丢失使肿瘤细胞逃避了CAR-T。

HER2和EGFR均属于表皮生长因子受体家族。表皮生长因子受体家族由 HER1(EGFR)至HER4组成。HER2被发现在乳腺癌、胃癌、肝胆癌、结直肠癌、 膀胱癌、非小细胞肺癌、卵巢癌和食道癌等多种肿瘤中过表达；而在成胶质细 胞瘤、肺癌、膀胱癌、乳腺癌等中，经常发现EGFR突变和过表达。它们均作 为驱动基因在促进肿瘤中发挥重要作用，是靶向治疗的重要靶标。

据报道，几种靶向HER2或EGFR的CAR-T可有效杀死癌细胞，但是CAR-T 都是基于HER2或EGFR抗体的部分肽段来制备的，这可能带来某些副作用，并 可能引起抗原的丢失和肿瘤细胞逃逸。

基于天然配体-受体的制备的CAR比源自抗体的CAR具有优势。基于天然 配体受体的EGFR CAR在小鼠模型中对体内和体外肿瘤细胞均表现出有效的作 用。然而，由于缺乏众所周知的HER2配体，因此没有基于天然配体-受体的CAR 靶向HER2。

因此，本领域迫切需要开发一种基于天然配体-受体的能够高效靶向EGFR 和HER2的嵌合抗原受体T细胞。

发明内容

本发明的目的就是提供一种基于天然配体-受体的能够高效靶向EGFR和 HER2的嵌合抗原受体T细胞。

在本发明的第一方面，提供了一种基于脯氨酸肽酶(Prolidase PEPD)改造 的嵌合抗原受体(CAR)，所述的CAR含有一胞外结合域，所述的胞外结合域能够同 时靶向HER2和EGFR。

在另一优选例中，所述的胞外结合域具有来源于脯氨酸肽酶(Prolidase PEPD)的氨基酸序列。

在另一优选例中，所述的胞外结合域包括脯氨酸肽酶或其片段。

在另一优选例中，所述的脯氨酸肽酶或其片段与HER2和EGFR均具有特异 性结合。

在另一优选例中，所述的脯氨酸肽酶或其片段具有如SEQ ID NO:1所示 的氨基酸序列，或具有如SEQ ID NO:1所示序列的N端第1至250-350位(较 佳地为N端第1至300-320位，更佳地第1至309位)的氨基酸序列。

在另一优选例中，所述的脯氨酸肽酶或其片段的氨基酸序列选自下组：

(i)如SEQ ID NO:1所示序列的第1至309位所示的序列；和