[发明专利]一种禽白血病病毒A/B/J亚群三重PCR检测引物及其应用

说明书

本发明公开了一种禽白血病病毒A/B/J亚群三重PCR检测引物，所述检测引物包括分别用于检测禽白血病病毒A、B和J亚群的引物。本发明还公开了禽白血病病毒A/B/J亚群三重PCR检测引物在禽白血病病毒检测中的应用。本发明建立的三重PCR方法可同时检测ALV A、B、J三个亚群，该方法临床试验检测结果与单重RT‑PCR检测结果一致，且具有操作简单、节约成本、特异性高、稳定性好的优点，可为临床上快速鉴别ALV A、B、J亚群提供了重要的技术支持。

技术领域

本发明涉及一种禽白血病病毒A/B/J亚群三重PCR检测引物及其应用，属于禽白血病病毒A/B/J亚群检测技术领域。

背景技术

禽白血病(Avian leukosis,AL)是由反转录病毒科，α-逆转录病毒属的禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的一类以淋巴细胞瘤、髓细胞瘤、血管瘤为主的肿瘤性疾病。ALV基因组主要包括gag、pol和env 3个基因，其中gag和pol基因相对保守，而包括gp85在内的env基因存在着较大变异，根据病毒囊膜蛋白gp85基因序列的差异，可将ALV分为A～K 11个亚群。11个亚群中，A、B、C、D、J和K 6个亚群为外源性病毒，能导致感染鸡出现明显的临床症状，致使机体产生肿瘤、生产性能下降，甚至死亡。其中A、B和J亚群是目前导致鸡群发病的优势毒种，在禽类养殖场中较为常见。

近年来，由于没有有效疫苗和药物可供使用，禽白血病的发病率逐渐升高，给养禽业造成了巨大的损失。目前，临床上主要采用病毒分离鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFA)、实时荧光定量PCR及RT-LAMP等方法来检测ALV，但其操作繁琐、费时费力、敏感性较差、易产生假阳性，应用这些方法难以快速进行早期诊断。

发明内容

基于上述，本发明提供一种禽白血病病毒A/B/J亚群三重PCR检测引物及其应用，以解决现有禽白血病病毒A/B/J亚群检测技术存在的操作繁琐、费时费力、敏感性较差、易产生假阳性的技术问题。

本发明的技术方案是：一种禽白血病病毒A/B/J亚群三重PCR检测引物，所述检测引物包括分别用于检测禽白血病病毒A、B和J亚群的引物，其中，

禽白血病病毒亚群A检测引物为：

上游引物F1：AGCCGGGGAACCTTTGGATTACAT

下游引物R1：TCCGCAACACCCACTGACATTACC

禽白血病病毒亚群B检测引物为：

上游引物F2：TCCTGGCGGCCCTGAGAACA

下游引物R2：CCGCAACATCCGCTGACATTACC

禽白血病病毒亚群J检测引物为：

上游引物F3：ATAAGACGGGCCGAACAGATTTTT

下游引物R3：CGCCCCACCAGTCCCATTA；

以上引物如SEQ ID NO.1、2、3、4、5、6所示。

本发明还提供一种所述的禽白血病病毒A/B/J亚群三重PCR检测引物在禽白血病病毒检测中的应用。

可选的，所述应用包括以下步骤：

(1)病毒分离及基因组提取；

(2)多重PCR反应；

(3)结果判断。

可选的，PCR进行扩增反应的反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性1min，58℃退火45s，72℃延伸2min，共35次循环；72℃再延伸10min。