[发明专利]一种快速杂交捕获试剂盒

说明书

本发明涉及一种快速杂交捕获试剂盒，通过改进试剂盒的组分，简化了试剂盒的实验流程，且通过对杂交方式的改进，使杂交捕获时间大大缩短；同时采用优化洗液2和洗液3的配方，有效改善了链霉亲和素磁珠粘壁现象，减少了链霉亲和素磁珠清洗过程中因粘壁而造成的损失，提高了捕获文库的浓度，并有效改善了杂交捕获效率和文库的均一性；此外试剂盒组分中稳定剂和保护剂的添加，使试剂盒可以长期室温稳定保存，使用方便。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种快速杂交捕获试剂盒。

背景技术

高通量测序技术(NGS)凭借其高通量、精确度高和信息量丰富等优势，在基础研究、产前诊断、遗传病诊断、肿瘤诊断与精准医疗等领域应用广泛。然而，进行全基因组测序不仅耗费时间和精力，还会产生很多冗余且无临床价值的数据，因此捕获特定区域进行检测是目前临床应用的主流处理方案。

与全基因组测序相比，靶向杂交捕获测序可对特定区域进行分离和富集，不仅检测灵敏度高，而且大大降低后续数据分析工作。因此，高效的捕获试剂盒至关重要。

目前市场上有多种杂交捕获试剂盒，其基本流程类似，以IDT公司的xGenHybridization and Wash Kit杂交捕获试剂盒为例。该试剂盒的组分主要包括：Human CotDNA、2x Hybridization Buffer、Hybridazation Buffer Enhancer、2xBeads WashBuffer、10xWash Buffer I、10xWash Buffer II、10xWash Buffer III、10xStringentWash Buffer、链霉亲和素磁珠M-270，还需要另外购买AMPure XP beads(Beckman公司)、IDTE(IDT公司)、Universal Blockers-TS Mix(IDT公司)、KAPA HiFi Hotstart Readymix(Roche公司)、Library Amplification Primer P5+P7(Life公司合成)、捕获探针(IDT公司定制)、Nuclease-free water(无核酸酶水，简称NFW，Life公司)等试剂。

上述现有的杂交捕获试剂盒组分较多，且需要现配现用，操作较繁琐，同时杂交时间长达16～72小时。此外，链霉亲和素磁珠经过65℃热洗之后，磁珠变得干燥，再使用洗液清洗时，磁珠粘壁现象严重，导致磁珠损失，进而使捕获效率和捕获文库均一性均有所降低，因此，目前市面上急缺杂交时间短且捕获性能好的试剂盒。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提出一种快速杂交捕获试剂盒。

为实现以上目的，本发明所采用的技术方案包括：

一种杂交反应液，其特征在于，所述杂交反应液包括：海藻糖、吐温和甘油。

进一步地，所述杂交反应液还包括xGen Hybridization Buffer Enhancer、xGen2X Hybridization Buffer、捕获探针和NFW。

进一步地，所述杂交反应液中，所述xGen Hybridization Buffer Enhancer的体积百分比为10～20％、所述xGen 2X Hybridization Buffer的体积百分比为40～60％、所述捕获探针的体积百分比为8～16％、所述海藻糖的质量百分比为1～20％、所述吐温的体积百分比为0.1～0.5％、所述甘油的体积百分比为5～30％、所述NFW的体积百分比为2～10％。

进一步地，所述杂交反应液中，所述xGen Hybridization Buffer Enhancer、所述xGen 2X Hybridization Buffer、所述捕获探针、所述吐温、所述甘油、和所述NFW的体积配比优选为270:850:200:5:200:75；所述海藻糖的质量百分比优选为5.88％。