[发明专利]一种基于甘油三酯的牛羊乳掺伪鉴别方法

权利要求书

1.一种基于甘油三酯的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)采用MTBE法，对乳样进行分离提取，得到乳样中的脂质成分；其中，乳样包括生牛乳和生羊乳；

2)采用液相色谱分离结合高分辨质谱鉴定，对步骤1)所得脂质成分进行一级数据轮廓采集和二级数据轮廓采集，得到脂质成分的原始轮廓信息；

3)对步骤2)所得脂质成分的原始轮廓信息进行格式转化后和校正处理，得到脂质成分的平行分析数据信息；将所得平行分析数据信息与脂质结构数据库进行鉴定，得到脂质成分的脂质分子矩阵；

4)对步骤3)所得脂质分子矩阵进行差异分析和多变量统计分析，筛选得到用于羊乳掺伪的脂质生物标志物；

5)将步骤4)所得用于羊乳掺伪的脂质生物标志物进行定量分析，用于待鉴别样品检测，实现牛羊乳掺伪鉴别。

2.根据权利要求1所述的一种基于甘油三酯的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，步骤1)中，采用MTBE法进行分离提取，具体包括以下操作：

①将乳样均匀分散于水中，得到混合体系A，向所得混合体系中加入体积比为1:5的甲醇/甲基叔丁基醚混合液后超声混合，得到混合体系B，向所得混合体系B中加入d7-TG，得到混合体系C；

②将步骤①所得混合体系C经涡旋振荡后进行超声混合处理，得到混合体系D，将所得混合体系D经冷冻离心留取上清液A；

③向步骤②所得上清液A中加入体积比为1:5的甲醇/甲基叔丁基醚混合液后重复步骤②两次，收集得到上清液B；将所得上清液B经氮吹干后得到乳样中的脂质成分，将所得乳样中的脂质成分与体积比为1:3的甲醇/二氯甲烷混合溶液复溶，得到用于步骤2)进行液相色谱分离结合高分辨质谱鉴定的待测样品。

3.根据权利要求2所述的一种基于甘油三酯的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，步骤①中，乳样、水、甲醇/甲基叔丁基醚混合液和d7-TG的体积比为50～60：250～300：700～1000：15；

步骤②中，涡旋振荡3～10min，超声混合处理10～20min，在4000～4500r/min下冷冻离心15～25min；

步骤②中，上清液A、甲醇/甲基叔丁基醚混合液和甲醇/二氯甲烷混合溶液的体积比为300～500：300～500：80～100。

4.根据权利要求1所述的一种基于甘油三酯的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，步骤2)中，液相色谱分离的检测条件为：在0～10min，55％洗脱流动相A；10～13.8min，10％洗脱流动相A；13.8～20min，55％洗脱流动相A的条件下，以250～300μL/min的流速对步骤1)所得脂质成分进行洗脱；

其中，采用Acclaim^TMTrinity P2Column色谱柱；

其中，洗脱流动相A为6～10mmol/L醋酸铵+65％乙腈+35％H₂O，流动相B为6～10mmol/L醋酸铵+15％乙腈+85％异丙醇。

5.根据权利要求1所述的一种基于甘油三酯的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，步骤2)中，高分辨质谱的检测条件为：

高分辨质谱的质谱仪器基于数据靶向扫描采集进行一级数据信息点和二级数据信息点采集；在每个数据信息点采集的循环中，对强度最高的前20个分子离子对应的二级数据信息点的质谱信息点进行数据采集；

碰撞能为35eV，45eV和55eV；

高分辨质谱所采用加热电喷雾离子源的参数设置如下：雾化气压：50～55Pa；辅助气压：20～25Pa；气帘气压：8～10Pa，温度：400～500℃；喷雾电压：+3000～4000V；

负模式参数设置如下：雾化气压：50～55Pa；辅助气压：20～25Pa；气帘气压：8～10Pa，温度：500～600℃；喷雾电压：-2800～3000V。

6.根据权利要求1所述的一种基于甘油三酯的牛羊乳掺伪鉴别方法，其特征在于，步骤3)中，格式转化的操作为对步骤2)所得脂质成分的原始轮廓信息转化为mzXML格式。