[发明专利]一种用于制备奥利司他中间体的生物酶及其应用

权利要求书

1.一种用于制备奥利司他中间体的生物酶，所述奥利司他中间体为(R)-β-羟基十四烷酸酯，其结构式如I所示，所述生物酶作用的底物为β-羰基十四烷酸酯，其结构式如II所示；其特征在于，所述生物酶为短链醇脱氢酶，所述短链醇脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1和/或与SEQ ID NO.1同源性大于90％的序列所示；

和/或，所述短链醇脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2和/或与SEQ ID NO.2同源性大于90％的序列所示；

和/或，所述短链醇脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3和/或与SEQ ID NO.3同源性大于90％的序列所示；

其中，R＝CH₃和/或C₂H₅。

2.根据权利要求1所述的生物酶，其特征在于：所述短链醇脱氢酶的氨基酸序列如SEQID NO.1和/或与SEQ ID NO.1同源性为99.5％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％的序列所示；和/或，所述短链醇脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2和/或与SEQ IDNO.2同源性为99.5％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％的序列所示；和/或，所述短链醇脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3和/或与SEQ ID NO.3同源性为99.5％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％的序列所示。

3.根据权利要求1所述的生物酶，其特征在于：所述生物酶为酶蛋白、酶粉、酶液、固定化酶或固定化细菌。

4.含有权利要求1-3任一项所述的生物酶的反应体系，其特征在于：所述反应体系还包括：底物、辅酶，所述底物为β-羰基十四烷酸酯，其结构式如II所示；所述辅酶为还原型辅酶I NADH或还原型辅酶II NADPH，和/或，所述辅酶为氧化型NAD+或NADP+，和/或，所述辅酶为能产生NADPH和/或NADH的酶。

5.根据权利要求4所述的反应体系，其特征在于：所述反应体系还包括葡萄糖脱氢酶和葡萄糖，或者，所述反应体系还包括醇；

和/或，所述反应体系的PH值在6-8之间；

和/或，所述反应体系还包括用于增加底物溶解性的助溶剂；

和/或，所述反应体系中，所述辅酶的浓度为0.1-0.5g/L。

6.根据权利要求5所述的用于制备奥利司他中间体的生物酶及其应用，其特征在于：所述葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；

和/或，所述反应体系中，所述底物与葡萄糖脱氢酶的摩尔比为1∶1.1-2；

和/或，所述反应体系的PH值在7.0-7.5之间；

和/或，采用碳酸氢钠水溶液或氢氧化钠水溶液作为所述反应体系的PH调节剂；

和/或，所述缓冲液为PBS或Tris-HCl；

和/或，所述醇选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、辛醇、戊醇、己醇、庚醇、乙二醇、丙三醇、异丙醇、丙二醇中的至少一种。

和/或，所述助溶剂选自二甲基亚砜、乙醇、丙酮、正己烷、环己烷、甲苯、乙酸乙酯、叔丁醇、异丙醇中的至少一种。

7.如权利要求1-3任一项所述的生物酶和/或如权利要求4-6任一项所述的反应体系在制备奥利司他中间体上的应用。

8.一种采用如权利要求4-6任一项所述的反应体系制备奥利司他中间体的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将所述反应体系混合均匀后进行搅拌反应，反应结束后，将反应体系中的酶灭活，然后经萃取、合并有机相、浓缩得到所述奥利司他中间体。